鼻腔遞送IGF-1對HIBD大鼠大腦的作用及FOXG1基因的表達(dá).pdf

1、目的：
　　 應(yīng)用新生7日齡SD大鼠建造缺氧缺血性腦損傷(HIBD)動物模型,經(jīng)鼻腔遞送胰島素樣生長因子-1(IGF-1),免疫組化法檢測內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖、遷移、分化情況,探索IGF-1對神經(jīng)的營養(yǎng)保護(hù)作用;RT-PCR法檢測HIBD后各組大鼠Foxg1mRNA表達(dá)變化情況,探索IGF-1對其表達(dá)的影響。。
　　 材料與方法：
　　 取7日齡SD新生大鼠,單純隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、IGF-1干預(yù)組。每

2、組按處死時(shí)間點(diǎn)不同,又分為HIBD后1d、3d、5d、7d、14d等5個(gè)亞組,共15個(gè)亞組。采用Rice法制作新生大鼠HIBD動物模型。模型對照組于HI后1h鼻腔遞送生理鹽水0.1ml;IGF-1干預(yù)組于HI后1h鼻腔遞送IGF-12.5μg;假手術(shù)組僅分離頸總動脈,不結(jié)扎不缺氧,不鼻腔灌注。選用5’-嗅尿嘧啶(Brdu)標(biāo)記新增殖細(xì)胞,巢蛋白(Nestin)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)標(biāo)記成熟神經(jīng)元,膠質(zhì)纖維酸性蛋白

3、(GFAP)標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞,Brdu-Nestin標(biāo)記新增殖的神經(jīng)干細(xì)胞,Brdu-NSE標(biāo)記增殖細(xì)胞分化的神經(jīng)元,Brdu-GFAP標(biāo)記增殖細(xì)胞分化的星形膠質(zhì)細(xì)胞。分別于術(shù)后1、3、5、7、14d處死大鼠。用于免疫組化實(shí)驗(yàn)的大鼠,在處死前一天被腹腔注射Brdu(50mg/kg次,共3次),最后一次注射4小時(shí)后斷頭取腦,固定、切片,HE染色觀察腦損傷組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;單、雙標(biāo)免疫組化染色法檢測側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ)、海馬區(qū)以及皮層

4、區(qū)Brdu陽性細(xì)胞、Brdu-Nestin、Brdu-NSE、Brdu-GFAP雙陽性細(xì)胞數(shù);用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)的大鼠,常規(guī)斷頭取腦,半定量RT-PCR法檢測各組大鼠腦組織Foxg1mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1模型鑒定
　　 大鼠制模前行為能力均正常,制模后翻身不能,夾尾不叫,夾尾左旋,常規(guī)HE染色顯示結(jié)扎側(cè)出現(xiàn)明顯的病理變化,主要為神經(jīng)元壞死,出現(xiàn)“紅色神經(jīng)元”。
　　 2免疫組化結(jié)果

5、r>　　 ①Brdu陽性細(xì)胞、Brdu-Nestin雙陽性細(xì)胞:模型對照組術(shù)后第1天開始增多,3天達(dá)高峰,7天減少,14天明顯減少,1d、3d、5d、7d、14d的Brdu陽性細(xì)胞數(shù)分別為:321.00±23.02、368.00±26.07、384.00±27.93、342.00±20.25、157.00±20.25;Brdu-Nestin雙陽性細(xì)胞分別為:10.00±2.28、24.00±5.66、21.00±3.41、15.00±

6、3.41、8.00±2.83;IGF-1干預(yù)組術(shù)后第1天增加明顯,3天顯著增多,5天達(dá)高峰期,7天稍減少,14天明顯減少,Brdu陽性細(xì)胞數(shù)值分別為:357.00±11.40、438.00±20.25、476.00±27.39、385.00±11.83、204.00±22.80;Brdu-Nestin雙陽性細(xì)胞分別為:18.00±3.41、43.00±7.07、85.00±7.07、56.00+7.07、37.00±3.41;假手術(shù)組無

7、明顯增殖現(xiàn)象,隨著時(shí)間的延長漸漸恢復(fù)到靜息狀態(tài),Brdu陽性細(xì)胞數(shù)分別為240.00±21.21、200.00±7.07、120.00±7.07、60.00±10.00;Brdu-Nestin幾無表達(dá)。在同一時(shí)間點(diǎn)各組間比較,IGF-1干預(yù)組高于模型對照組高于假手術(shù)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);②Brdu-NSE、Brdu-GFAP雙標(biāo)陽性細(xì)胞:模型對照組術(shù)后第7天開始出現(xiàn),但胞體小,突起細(xì)、短,第14天細(xì)胞數(shù)增多,且胞體增大

8、,突起增粗、增長,Brdu-NSE每個(gè)時(shí)間點(diǎn)數(shù)值為:15.00±2.27、25.00±3.96;Brdu-GFAP數(shù)值分別為:35.00±3.96、45.00+4.72;IGF-1干預(yù)組術(shù)后第5天就有少量陽性細(xì)胞,第7天在腦部有明顯增加,14天增多達(dá)高峰,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)數(shù)值分別為:Brdu-NSE:40.00±10.06、50.00±6.39;BrdU-GFAP:20.00±3.42、26.00±6.28。假手術(shù)組無表達(dá)。同一時(shí)間點(diǎn)兩組比較

9、,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3半定量RT-PCR結(jié)果
　　 假手術(shù)組Foxg1mRNA的表達(dá)基本穩(wěn)定,無明顯的變化,第1、3、5、7、14d的結(jié)果分別為0.77±0.046、0.65±0.134、0.76±0.041、0.68±0.047、0.72±0.024;模型對照組:前3天FoxglmRNA的表達(dá)減少,3天后開始增加,7天時(shí)接近假手術(shù)組,結(jié)果分別為0.60±0.037、0.53±0.056、0.6

10、2±0.054、0.74±0.053、0.78±0.043;IGF-1干預(yù)組:Foxg1mRNA的表達(dá)趨勢與模型對照組相同,但表達(dá)量高于同時(shí)間的對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),結(jié)果分別為0.65±0.054、0.64±0.059、0.73±0.051、0.80±0.051、0.84+0.051。
　　 結(jié)論
　　 鼻腔遞送IGF-1能促進(jìn)HIBD后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化;IGF-1也能促進(jìn)Foxg1基因的