缺血后處理對糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷線粒體功能的影響.pdf

1、目的: 建立糖尿病大鼠合并急性腦缺血再灌注動物模型；探討缺血后處理(I-Post)對糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷細胞凋亡、線粒體超微結構、自由基系統(tǒng)及ATP酶活性的影響；探討I-Post對糖尿病合并急性腦缺血的保護機制。 方法: (1)采用腹腔內(nèi)注射鏈脲霉素(STZ)建立實驗性大鼠糖尿病模型，在此基礎上采用線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。健康成年SD大鼠75只，STZ腹腔注射建立糖尿病(DM)大鼠模型，

2、并隨機分為空白對照組、假手術組、缺血再灌注組(I/R)、缺血后處理組(I-Post)。 (2)缺血后處理方法：缺血90 min后完全復灌之前施行三次短暫缺血，將線栓拔出5mm，15s后再將線栓放入15s，即再灌注15s后缺血15s，反復3次。 (3)再灌注6h后采用Longa 5分制評分標準對各組大鼠進行神經(jīng)行為學評分(NDS)。 (4)再灌注6h后采用TTC染色法測定腦梗死體積；光鏡下觀察缺血腦組織病理變化特點

3、；應用TUNEL染色觀察并計數(shù)腦組織缺血區(qū)陽性細胞數(shù)；電鏡下觀察線粒體超微結構；檢測缺血側腦組織線粒體中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase含量的變化。 (5)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析；神經(jīng)行為學評分以中位數(shù)表示，組間比較采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)

4、計學意義。 結果: (1)糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿等糖尿病的典型癥狀，大鼠血糖平均為(24.6±3.5)mmol/L。空白對照組和假手術組未見明顯神經(jīng)功能損害，NDS評分均為0分，I/R組和I-Post組均表現(xiàn)為不同程度的神經(jīng)功能缺損，I/R組與I-Post組之間的神經(jīng)行為學評分沒有統(tǒng)計學意義。 (2)鼠腦TTC染色結果非梗死區(qū)腦組織被染成紅色，梗死區(qū)呈現(xiàn)蒼白色，且蒼白區(qū)與大腦中動脈供血分布區(qū)域一致，

5、I/R組較I-Post組蒼白區(qū)面積大。 (3)細胞形態(tài)學觀察空白對照組和假手術組未見明顯的神經(jīng)元損傷，I/R組顯微鏡下呈現(xiàn)典型的缺血性改變，表現(xiàn)為組織疏松、染色變淺、細胞空泡樣變性，胞核固縮呈三角形，核仁消失。I-Post組梗死灶較I/R組明顯減小，梗死中心區(qū)范圍減小，周圍可見形態(tài)基本正常的神經(jīng)細胞。 (4)原位細胞凋亡檢測(TUNEL法)凋亡細胞的表現(xiàn)為神經(jīng)元細胞體積縮小，細胞核固縮、染色質濃縮、邊聚?？瞻讓φ战M及假手

6、術組僅可見少量散在的陽性細胞，I/R組可見梗死灶區(qū)有大量TUNEL陽性細胞，而I-Post組陽性細胞數(shù)明顯減少。 (5)腦線粒體的電鏡觀察空白對照組和假手術組可見基本正常的線粒體，I/R組可見神經(jīng)元壞死，線粒體數(shù)量減少，明顯腫脹、空泡化，嵴排列不規(guī)則，甚至斷裂、溶解、消失。I-Post組可見部分線粒體空化，線粒體損傷較I/R組明顯減輕。 (6)腦線粒體ATP酶、MDA、SOD、GStt-PX的測定再灌注6h后I/R組腦線

7、粒體的SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶及GSH活性出現(xiàn)顯著降低，MDA含量明顯增高：I-Post組的SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和GSH活性與I-R組比較有不同程度的恢復，MDA含量明顯降低。 結論: (1)I-Post可減輕缺血組織的再灌注損傷現(xiàn)象同樣存在于腦組織； (2)I-Post對近期神經(jīng)行為學的改善作用不明顯； (3)I-Post可以抑制糖尿病大鼠腦神經(jīng)細