缺血后處理對(duì)糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷線粒體功能的影響.pdf

1、目的: 建立糖尿病大鼠合并急性腦缺血再灌注動(dòng)物模型；探討缺血后處理(I-Post)對(duì)糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡、線粒體超微結(jié)構(gòu)、自由基系統(tǒng)及ATP酶活性的影響；探討I-Post對(duì)糖尿病合并急性腦缺血的保護(hù)機(jī)制。 方法: (1)采用腹腔內(nèi)注射鏈脲霉素(STZ)建立實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病模型，在此基礎(chǔ)上采用線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。健康成年SD大鼠75只，STZ腹腔注射建立糖尿病(DM)大鼠模型，

2、并隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血再灌注組(I/R)、缺血后處理組(I-Post)。 (2)缺血后處理方法：缺血90 min后完全復(fù)灌之前施行三次短暫缺血，將線栓拔出5mm，15s后再將線栓放入15s，即再灌注15s后缺血15s，反復(fù)3次。 (3)再灌注6h后采用Longa 5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(NDS)。 (4)再灌注6h后采用TTC染色法測(cè)定腦梗死體積；光鏡下觀察缺血腦組織病理變化特點(diǎn)

3、；應(yīng)用TUNEL染色觀察并計(jì)數(shù)腦組織缺血區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)；電鏡下觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)；檢測(cè)缺血側(cè)腦組織線粒體中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase含量的變化。 (5)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析；神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分以中位數(shù)表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: (1)糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿等糖尿病的典型癥狀，大鼠血糖平均為(24.6±3.5)mmol/L?？瞻讓?duì)照組和假手術(shù)組未見明顯神經(jīng)功能損害，NDS評(píng)分均為0分，I/R組和I-Post組均表現(xiàn)為不同程度的神經(jīng)功能缺損，I/R組與I-Post組之間的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)鼠腦TTC染色結(jié)果非梗死區(qū)腦組織被染成紅色，梗死區(qū)呈現(xiàn)蒼白色，且蒼白區(qū)與大腦中動(dòng)脈供血分布區(qū)域一致，

5、I/R組較I-Post組蒼白區(qū)面積大。 (3)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察空白對(duì)照組和假手術(shù)組未見明顯的神經(jīng)元損傷，I/R組顯微鏡下呈現(xiàn)典型的缺血性改變，表現(xiàn)為組織疏松、染色變淺、細(xì)胞空泡樣變性，胞核固縮呈三角形，核仁消失。I-Post組梗死灶較I/R組明顯減小，梗死中心區(qū)范圍減小，周圍可見形態(tài)基本正常的神經(jīng)細(xì)胞。 (4)原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)(TUNEL法)凋亡細(xì)胞的表現(xiàn)為神經(jīng)元細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞核固縮、染色質(zhì)濃縮、邊聚。空白對(duì)照組及假手

6、術(shù)組僅可見少量散在的陽性細(xì)胞，I/R組可見梗死灶區(qū)有大量TUNEL陽性細(xì)胞，而I-Post組陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少。 (5)腦線粒體的電鏡觀察空白對(duì)照組和假手術(shù)組可見基本正常的線粒體，I/R組可見神經(jīng)元壞死，線粒體數(shù)量減少，明顯腫脹、空泡化，嵴排列不規(guī)則，甚至斷裂、溶解、消失。I-Post組可見部分線粒體空化，線粒體損傷較I/R組明顯減輕。 (6)腦線粒體ATP酶、MDA、SOD、GStt-PX的測(cè)定再灌注6h后I/R組腦線

7、粒體的SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶及GSH活性出現(xiàn)顯著降低，MDA含量明顯增高：I-Post組的SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和GSH活性與I-R組比較有不同程度的恢復(fù)，MDA含量明顯降低。 結(jié)論: (1)I-Post可減輕缺血組織的再灌注損傷現(xiàn)象同樣存在于腦組織； (2)I-Post對(duì)近期神經(jīng)行為學(xué)的改善作用不明顯； (3)I-Post可以抑制糖尿病大鼠腦神經(jīng)細(xì)