小反芻獸疫病毒H蛋白對病毒增殖的影響.pdf

1、小反芻獸疫（Peste des petits ruminants, PPR）是由小反芻獸疫病毒（Peste des petits ruminants virus, PPRV）引起的一種嚴重的烈性、接觸性傳染病，是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）法定報告的動物疫病。2007年7月我國首次發(fā)生該病，2013年12月以來該病在我國大規(guī)模流行，造成嚴重危害。因此，加強對小反芻獸疫病毒基礎(chǔ)及應(yīng)用研究具有重要的現(xiàn)實意義。本研究就小反芻獸疫病毒 H基因進行

2、了真核表達，并研究了其過表達后對病毒增殖的影響，以期為提高疫苗產(chǎn)量提供一定的基礎(chǔ)。
　　設(shè)計引物通過RT-PCR擴增小反芻獸疫病毒N基因，連接到克隆載體pMD19-T上，構(gòu)建質(zhì)粒標準品。利用SYBR GreenⅠ法進行熒光定量PCR，建立標準曲線，并進行特異性試驗、敏感性試驗和重復(fù)性試驗。結(jié)果表明，Ct值與質(zhì)?？截悢?shù)對數(shù)值呈很好的線性關(guān)系，特異性和重復(fù)性良好，檢測靈敏度可達2.82拷貝/μL，是普通PCR的1000倍。
　　

3、設(shè)計引物通過RT-PCR擴增小反芻獸疫病毒H基因全長編碼區(qū)序列，并將其連接至真核表達載體pEGFP-C3上，經(jīng)鑒定正確后轉(zhuǎn)染CHS-20細胞，并通過RT-PCR、熒光觀察及Western blot分別在mRNA和蛋白水平檢測H基因的表達。結(jié)果表明，H基因在CHS-20細胞內(nèi)得到了表達。
　　將pEGFP C3-PPRV H重組質(zhì)粒、空載體pEGFP-C3轉(zhuǎn)染CHS-20細胞，待H基因表達后，接種 PPRV Nigeria75/1，