豬瘟病毒NS3互作蛋白TRAF5及對(duì)豬瘟病毒增殖的影響.pdf

1、豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重的傳染病。我國(guó)通過(guò)兔化弱毒疫苗的使用有效地控制了豬瘟的流行，然而非典型豬瘟的出現(xiàn)使得豬瘟的防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻。非典型豬瘟造成豬群的持續(xù)帶毒排毒，但外表健康，這種持續(xù)性感染是造成我國(guó)豬瘟仍然發(fā)生的一個(gè)重要原因。在這個(gè)過(guò)程中，CSFV與宿主細(xì)胞的長(zhǎng)期共存是CSFV能夠持續(xù)性感染的主要原

2、因之一，一方面CSFV利用宿主的物質(zhì)來(lái)進(jìn)行自身的組裝，另一方面通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)控宿主的相關(guān)反應(yīng)，來(lái)創(chuàng)造利于自身增殖的細(xì)胞微環(huán)境，從而達(dá)到免疫逃逸的結(jié)果。因此，研究CSFV免疫逃逸的相關(guān)機(jī)制，有助于了解CSFV持續(xù)性感染的原因，為豬瘟的防控提供科學(xué)依據(jù)，而腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(tumor necrosis factorreceptor-associated factors，TRAF)作為天然免疫通路中的重要分子，在多個(gè)免疫通路中發(fā)揮著重要作

3、用。本文研究了CSFV NS3蛋白與TRAF5蛋白之間的相互作用，進(jìn)而探究了TRAF5對(duì)CSFV增殖的影響，獲得了以下結(jié)果。
　　(1)證實(shí)CSFV NS3蛋白與宿主TRAF5蛋白之間存在直接的相互作用。成功構(gòu)建TRAF5基因和CSFV NS3基因的相關(guān)表達(dá)載體，通過(guò)外源性和內(nèi)源性Co-IP試驗(yàn)，都檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)的TRAF5-NS3蛋白復(fù)合體，通過(guò)GST-Pulldown試驗(yàn)，在體外檢測(cè)到TRAF5-NS3復(fù)合體，同時(shí)，通過(guò)激光共聚

4、焦試驗(yàn)，觀察到TRAF5蛋白與CSFV NS3蛋白在PAM細(xì)胞中存在共定位現(xiàn)象。
　　(2)證明TRAF5通過(guò)誘導(dǎo)IL-10的表達(dá)促進(jìn)CSFV的增殖。成功構(gòu)建TRAF5過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系和TRAF5 shRNA干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，通過(guò)RT-qPCR和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TRAF5過(guò)表達(dá)細(xì)胞系中CSFV的增殖能力顯著增強(qiáng)，而在TRAF5干擾細(xì)胞系中，CSFV的增殖受到明顯的抑制;在隨后對(duì)細(xì)胞因子的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，TRAF5過(guò)表達(dá)