豬瘟病毒NS3互作蛋白TRAF5及對豬瘟病毒增殖的影響.pdf

1、豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴重的傳染病。我國通過兔化弱毒疫苗的使用有效地控制了豬瘟的流行，然而非典型豬瘟的出現(xiàn)使得豬瘟的防控形勢依然嚴峻。非典型豬瘟造成豬群的持續(xù)帶毒排毒，但外表健康，這種持續(xù)性感染是造成我國豬瘟仍然發(fā)生的一個重要原因。在這個過程中，CSFV與宿主細胞的長期共存是CSFV能夠持續(xù)性感染的主要原

2、因之一，一方面CSFV利用宿主的物質(zhì)來進行自身的組裝，另一方面通過誘導調(diào)控宿主的相關反應，來創(chuàng)造利于自身增殖的細胞微環(huán)境，從而達到免疫逃逸的結(jié)果。因此，研究CSFV免疫逃逸的相關機制，有助于了解CSFV持續(xù)性感染的原因，為豬瘟的防控提供科學依據(jù)，而腫瘤壞死因子受體相關因子(tumor necrosis factorreceptor-associated factors，TRAF)作為天然免疫通路中的重要分子，在多個免疫通路中發(fā)揮著重要作

3、用。本文研究了CSFV NS3蛋白與TRAF5蛋白之間的相互作用，進而探究了TRAF5對CSFV增殖的影響，獲得了以下結(jié)果。
　　(1)證實CSFV NS3蛋白與宿主TRAF5蛋白之間存在直接的相互作用。成功構(gòu)建TRAF5基因和CSFV NS3基因的相關表達載體，通過外源性和內(nèi)源性Co-IP試驗，都檢測到細胞內(nèi)的TRAF5-NS3蛋白復合體，通過GST-Pulldown試驗，在體外檢測到TRAF5-NS3復合體，同時，通過激光共聚

4、焦試驗，觀察到TRAF5蛋白與CSFV NS3蛋白在PAM細胞中存在共定位現(xiàn)象。
　　(2)證明TRAF5通過誘導IL-10的表達促進CSFV的增殖。成功構(gòu)建TRAF5過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系和TRAF5 shRNA干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，通過RT-qPCR和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，TRAF5過表達細胞系中CSFV的增殖能力顯著增強，而在TRAF5干擾細胞系中，CSFV的增殖受到明顯的抑制;在隨后對細胞因子的檢測中發(fā)現(xiàn)，TRAF5過表達