小反芻獸疫病毒H基因與IFN-γ基因共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf

1、小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性、烈性、接觸性傳染病，因危害嚴(yán)重被世界衛(wèi)生組織列為A類傳染病。2007年我國(guó)首次報(bào)道發(fā)生PPR疫情，PPR疫情在我國(guó)周邊國(guó)家及境內(nèi)的不斷發(fā)生對(duì)我國(guó)動(dòng)物疫病的防控提出了新的要求，對(duì)PPR的診斷和預(yù)防成為研究熱點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)選取了小反芻獸疫病毒H作為免疫原基因，并以共刺激分子IFN-γ基因?yàn)樽魟┗騺?lái)構(gòu)建真核表達(dá)載體，利用BHK-21細(xì)胞、小鼠作為模型研究核酸疫苗在BHK-21細(xì)胞中表達(dá)、誘導(dǎo)

2、小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的能力、IFN-γ的免疫增強(qiáng)作用，獲得如下結(jié)果： 1.小反芻獸疫H基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及在BHK-21細(xì)胞中表達(dá)：小反芻獸疫H基因的克隆，本研究對(duì)小反芻獸疫H基因進(jìn)行pGEM-T載體克隆與測(cè)序。通過(guò)NotⅠ和xholⅠ雙酶切，定向粘末段連接法，用pBudce4.1載體構(gòu)建了真核表達(dá)載體pBud-H和pBud-IFN-γ/H。用脂質(zhì)體法將pBud-H和pBud-IFN-γ/H分別轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，通過(guò)熒

3、光抗體檢測(cè)，目的基因在BHK-21細(xì)胞中獲得了表達(dá)。 2.核酸疫苗誘導(dǎo)小鼠體液和細(xì)胞免疫的研究：pBud-H和pBud-IFN-γ/H分別免疫4周齡雌BALB/c小鼠，2周后加強(qiáng)免疫一次，每周用ELISA檢測(cè)小鼠血清中的抗體水平，隔周用MTT法檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，結(jié)果表明DNA疫苗均可有效引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，而且pBud-IFN-γ/H的免疫產(chǎn)生的抗體水平以及細(xì)胞免疫水平都比pBud-H要高，結(jié)果表明，小反