小反芻獸疫病毒核衣殼（N）蛋白的原核表達.pdf

1、小反芻獸疫(pestedespetitsruminants，PPR)是由小反芻獸疫病毒(pestedespetitsruminantsvirus，PPRV)引起的一種感染山羊、綿羊等小反芻獸類的急性接觸性傳染疾病，被OIE確定為A類動物疫病，易感群中發(fā)病率高達100％，嚴重爆發(fā)時致死率為100％。本病在臨床上以發(fā)熱、口炎、腹瀉和肺炎為特征，對羊，尤其是山羊危害嚴重，野生動物也可感染。據(jù)農(nóng)業(yè)部公告，2007年7月在我國西藏發(fā)生小反芻獸疫疫

2、情，這是我國首次傳入小反芻獸疫疫情。由于PPRV核衣殼(N)蛋白是其主要的結(jié)構蛋白，具有多種重要生物學功能，在致病和免疫機制中發(fā)揮著重要作用，是小反芻獸疫鑒別診斷的可靠標記。 本研究參照GenBank中小反芻獸疫病毒(PPRV)N抗原基因序列(Nigeria/75/1)(1578bp)設計了一對添加EcoRⅠ和NotⅠ酶切位點的引物，對從奧地利引進的pCI-neo-N質(zhì)粒進行PCR擴增，并克隆至pGM-T載體中，轉(zhuǎn)化E.coli

3、TOP10感受態(tài)細胞，獲得重組質(zhì)粒pGM-T-N，將重組質(zhì)粒經(jīng)EcoRⅠ和NotⅠ雙酶切產(chǎn)物插入原核表達載體pET-32a(+)，構建原核表達載體pET-32a-N，將其轉(zhuǎn)化進BL21(DE3)感受態(tài)細胞中后用IPTG誘導表達，收集菌液進行SDS-PAGE電泳和Western-blotting分析。結(jié)果表明：小反芻獸疫病毒N基因在BL21(DE3)成功表達，所表達融合蛋白的相對分子質(zhì)量約為80kD并能被組氨酸單抗及PPRV陽性羊血清所識