卵巢上皮癌耐泰素和非耐泰素細(xì)胞間差異表達(dá)基因與蛋白篩選鑒定研究.pdf

1、為了更好的認(rèn)識(shí)卵巢癌的多藥耐藥機(jī)制，我們用泰素對(duì)卵巢卵巢漿液性乳頭狀腺癌細(xì)胞SKOV3進(jìn)行間斷、大劑量沖擊，建立了卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3/TS，并且從蛋白和基因兩個(gè)水平篩選、鑒定了兩種細(xì)胞間的差異蛋白分子。 第一部分：卵巢上皮癌泰素耐藥細(xì)胞株相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)驗(yàn)證研究 目的：對(duì)泰素耐藥細(xì)胞株SKOV3frs進(jìn)行相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)驗(yàn)證。方法：MTT法檢測(cè)SKOV3/TS對(duì)泰素的耐藥指數(shù)及對(duì)健擇、奧沙利鉑、米托蒽醌、

2、VP-16、異環(huán)磷酰胺的交叉耐藥性；采用21天細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線并計(jì)算其倍增時(shí)間。結(jié)論：SKOV3/TS表現(xiàn)出典型的多藥耐藥特征，該耐藥模型十分穩(wěn)定達(dá)到了后續(xù)的蛋白和基因?qū)嶒?yàn)的實(shí)驗(yàn)要求。 第二部分：卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細(xì)胞間差異表達(dá)蛋白篩選鑒定研究研究 目的：比較卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細(xì)胞間的蛋白表達(dá)差異，并進(jìn)行相關(guān)蛋白的篩選和鑒定。方法：提取卵巢癌耐泰素細(xì)胞SKOV3frs和親本細(xì)胞SKOV

3、3的總蛋白，用蛋白二維液相分離色譜技術(shù)(ProtemeLabTM PF-2D)對(duì)總蛋白進(jìn)行分級(jí)分離，然后用其自帶的Proteovue和Deltavue分析軟件進(jìn)行兩種細(xì)胞間差異蛋白的篩選； 用電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MS/MS)結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)進(jìn)行差異蛋白的鑒定。結(jié)果：共分離篩選出差異蛋白12個(gè)，其中SKOV3/TS表達(dá)上調(diào)的12個(gè)，SKOV3表結(jié)論：PF-2D結(jié)合ESI-MS/MS是一種進(jìn)行能夠差異蛋白篩選、鑒定的有效方法

4、。鑒定出的蛋白通過多種復(fù)雜機(jī)制介導(dǎo)了卵巢癌對(duì)泰素類的耐藥性的產(chǎn)生，這些蛋白有可能成為療效預(yù)測(cè)分子或新的治療靶標(biāo)。 第三部分：卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細(xì)胞間差異表達(dá)基因篩選鑒定研究研究 目的：比較卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細(xì)胞間的基因表達(dá)差異，并進(jìn)行相關(guān)基因的篩選和鑒定。方法：采用人類全基因組表達(dá)譜芯片對(duì)卵巢癌耐泰素細(xì)胞SKOV3/TS和親本細(xì)胞SKOV3進(jìn)行差異基因的篩選和分析；用熒光定量RT-PCR對(duì)芯片結(jié)果