肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(ABCE1)的篩選及RNAi對肺癌細(xì)胞95-D增殖、黏附因子的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（ABCE1）的篩選及RNAi對肺癌細(xì)胞95-D增殖、黏附因子的影響姓名：鄭毛根申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：胸外科指導(dǎo)教師：田大力20080301材料與方法一、材料( 一) 標(biāo)本細(xì)胞株1 、標(biāo)本： 四種肺癌標(biāo)本均來源于中國醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院胸外科2 0 0 6年3 月一6 月的手術(shù)切除的肺癌標(biāo)本；其中小細(xì)胞肺癌病灶標(biāo)本1 例，小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶1 例，肺腺癌病灶標(biāo)本1 例，低分化鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴

2、結(jié)病灶1 例。2 、細(xì)胞株： 人肺腺癌細(xì)胞株9 5 一D 、小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株N C I - H 2 9 2 、N C I - H 4 4 6均購自中科院上海細(xì)胞所。( 二) 、主要試劑m R N A 提取試劑盒、R A C E c D N A 擴(kuò)增試劑盒、P C R 試劑盒、T r i z o l 試劑、M - M u L V逆轉(zhuǎn)錄酶、T 4 D N A 連接酶、B s t ZI 限制性內(nèi)切酶、胰蛋白酶、G 4 1 8 ( G i b

3、c o - B R L ) 、轉(zhuǎn)染試劑F U G E N E 6 、E L I S A 試劑盒、M T T 試劑盒、兔抗人上皮性鈣砧附蛋白單克隆抗體( ( 4 A 2 C 7 ) 、兔抗人B _ 連接素單克隆抗體( C A T - S H1 0 ) 、即用型S P 試劑盒、D A B 試劑盒等。二、方法l 、三種肺癌細(xì)胞株及四種肺癌手術(shù)標(biāo)本總R N A 的提取。2 、運(yùn)用R T - P C R 技術(shù)中，對肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因C 1 ，L 1

4、 ，L 2 片段進(jìn)行驗(yàn)證，釣取目的片段。3 、運(yùn)用R A C E ( c D N A 末端快速擴(kuò)增) 技術(shù)克隆出其基因全長序列，并登錄G e n b a n k ，進(jìn)行序列比對，確定克隆的基因性質(zhì)。4 、根據(jù)A B C E I 基因，設(shè)計(jì)發(fā)卡結(jié)構(gòu)序列長度為7 lb P 的兩對有效干擾和一對負(fù)對照的反向重復(fù)序列，其兩端帶有B a m HI 、H i n dI l l 酶切位點(diǎn)，中間被9b p 環(huán)結(jié)構(gòu)分割。并以6 個(gè)T 作為R N A 聚合