ABCE1蛋白在肺癌、癌旁組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的Western blot和免疫組化法檢測.pdf

1、目的：
　　 原發(fā)性支氣管肺癌(primary bronchoginic carcinoma,或稱肺癌),是指起源于支氣管粘膜上皮或腺體的惡性腫瘤。其發(fā)病率和死亡率一直居高不下,自上世紀(jì)80年代起,已成為全球范圍內(nèi)發(fā)病率最高的惡性腫瘤。肺癌早期診斷困難,65％的患者在確診時(shí)已屬晚期,轉(zhuǎn)移成為其致死和治療失敗的主要因?yàn)?。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是肺癌擴(kuò)散的主要途徑,也是影響手術(shù)根治性及預(yù)后的主要因素。如果能找出淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因,對認(rèn)清腫瘤的進(jìn)

2、展和轉(zhuǎn)移以及治療有很大的幫助。ABCE1基因(ATP-binding cassette transporter E1)屬ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子基因亞家族成員之一,其編碼的ABCE1蛋白的結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)N端的Fe-S區(qū)和兩個(gè)核酸結(jié)合區(qū),文獻(xiàn)報(bào)道ABCE1是一種高度保守的蛋白,在所有的真核及原核生物中都有一到兩種轉(zhuǎn)錄本普遍表達(dá)。ABCE1蛋白最初被發(fā)現(xiàn)能夠特異性結(jié)合并抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)一種被干擾素誘導(dǎo)的核糖核酸酶L,因此又名為核糖核酸酶L抑制因

3、子,之后的研究表明它在HIV、SIV病毒限制性多肽的聚集方面也發(fā)揮著必須的作用。在酵母中的研究顯示,ABCE1表達(dá)的蛋白參與了細(xì)胞分裂及蛋白質(zhì)翻譯起始復(fù)合物的形成,同樣證實(shí),人類ABCE1通過與翻譯起始因子eIF2α和eIF5的結(jié)合從而在mRNA翻譯的起始過程中發(fā)揮著必不可少的作用。眾所周知,腫瘤細(xì)胞的蛋白翻譯過程異?？哼M(jìn),許多參與翻譯過程的蛋白因子如核糖體蛋白S6激酶,mTOR和4E-BP1等都已成為腫瘤干預(yù)治療的分子靶點(diǎn)。體外實(shí)驗(yàn)表

4、明,抑制ABCE1表達(dá)能有效抑制人類腫瘤細(xì)胞的生長。因此,我們推測在腫瘤細(xì)胞中通過抑制ABCE1的表達(dá)可有效遏制腫瘤的進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)就是通過免疫印跡(western blot)技術(shù)及免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白.過氧化物(streptavidinperoxidase,SP)法檢測ABCE1蛋白在肺癌原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)與癌旁肺組織之間的表達(dá)差異,從而評價(jià)其對肺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的影響,評價(jià)其可能的臨床意義。
　　 實(shí)驗(yàn)方法
　　 本

5、實(shí)驗(yàn)采集臨床手術(shù)切除的不同肺葉或肺段的人肺癌組織標(biāo)本,及其轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和距離腫瘤邊緣≥5厘米的癌旁肺組織配對標(biāo)本,用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物(streptavidin peroxidase,SP)法對ABCE1蛋白進(jìn)行定位,用免疫印跡法(Western Blot)法檢測ABCE1蛋白的表達(dá)量差異。
　　 結(jié) 果
　　 1.ABCE1蛋白在肺癌組織的相對表達(dá)量為1.032±0.510,在癌旁組織的相對表達(dá)量為0.

6、631±0.619,二者比較有顯著性差異。P<0.05
　　 2.ABCE1蛋白在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織的相對表達(dá)量1.269±0.755,在癌旁組織的相對表達(dá)量為0.631±0.619,二者比較有顯著性差異。P<0.05
　　 3.ABCE1蛋白在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織的相對表達(dá)量1.269±0.755,在肺癌組織的相對表達(dá)量為1.032±0.510,二者比較有顯著性差異。P<0.05
　　 4.ABCE1蛋白在肺腺癌組織的相

7、對表達(dá)量為1.25±0.79,在肺鱗癌組織的相對表達(dá)量為0.78±0.30,二者比較有顯著性差異。P<0.05
　　 5.在高、中、低分化互相比較時(shí),各組比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 6.免疫組化結(jié)果示:ABCE1的蛋白表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿。
　　 結(jié) 論
　　 1.ABCE1蛋白在肺癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織的表達(dá)量明顯上調(diào),且在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)量明顯增高,但是與組織的分化程度無關(guān)。
　　 2.AB