逐痰通絡湯對大鼠局灶性腦缺血的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討逐痰通絡湯對大鼠局灶性腦缺血的保護作用及其機制. 方法：實驗選用清潔級雄性12周齡SD大鼠108只,隨機分為3組:假手術組(K組)、模型組(C組)、逐痰通絡湯組(Z組).K組、C組、Z組各36只.K組只分離頸動脈,不插線栓.C組、Z組復制永久性大腦中動脈閉塞(MCAO)模型.模型制作前,K組自由飲食飲水不作特殊處理,C組每只大鼠先用生理鹽水(10ml/Kg/d)灌胃7天,Z組每只大鼠先用逐痰通絡湯(10ml/Kg/d)

2、灌胃7天.定模型復制同為第0天,C組于第0天起每只大鼠灌胃給生理鹽水(10ml/Kg/d);Z組于第0天起每只大鼠灌胃給逐痰通絡湯(10ml/Kg/d).分別于模型復制后第1天、第3天、第7天,K組、C組、Z組各隨機抽取6只大鼠,4﹪多聚甲醛灌注固定后留取大腦標本;K組、C組、Z組各隨機抽取6只大鼠,用斷頭法處死后留取大腦標本和第7天血液標本.觀察各組動物神經(jīng)功能缺損并評分;腦組織TTC染色并測定梗死體積;光鏡觀察腦組織病理學改變;發(fā)色

3、底物法測定血漿組織型纖溶酶原激活物、組織型纖溶酶原激活抑制物、纖溶酶原活性,ELISA法測定血漿D-二聚體含量;應用免疫組化法檢測MMP-9蛋白表達,原位雜交法觀察MMP-9 mRNA表達. 結(jié)果：1.神經(jīng)功能缺損評分:K組大鼠不同時間點評分均為0分,即無神經(jīng)功能缺損.C組、Z組各時間點均出現(xiàn)不同程度神經(jīng)功能缺損,術后第1天出現(xiàn)高峰,分值隨著時間增長而呈現(xiàn)減少趨勢.C組在第7天分值高于Z組(P<0.05).C組內(nèi)不同時間點比較,

4、第3天分值與第1天無明顯差異(P>0.05),第7天分值低于第1天(P<0.05).Z組內(nèi)不同時間點比較,第3天分值低于第1天(P<0.05):第7天分值明顯低于第1天(P<0.01). 2.腦組織TTC染色及梗死體積測定:各缺血模型腦組織TTC染色,表現(xiàn)為正常腦組織呈紅色,缺血壞死組織呈白色.K組大鼠不同時間點梗死體積測定均為0,即無梗死灶.C組、Z組各時間點均出現(xiàn)不同程度梗死,術后第1、3天出現(xiàn)高峰,梗死體積隨著時間增長而呈

5、現(xiàn)減少趨勢.C組在第7天梗死體積大于Z組(P<0.05).C組內(nèi)不同時間點比較,第7天梗死體積小于第1天(P<0.05).Z組內(nèi)不同時間點比較,第7天梗死體積明顯小于第1天和第3天(P<0.01). 3.腦組織病理光鏡觀察:K組神經(jīng)細胞數(shù)量多,細胞分布層次清楚,細胞結(jié)構清晰.C組、Z組左側(cè)大腦皮質(zhì)及皮質(zhì)下區(qū)出現(xiàn)固定梗死灶,缺血區(qū)及周邊存在大量萎縮變性的神經(jīng)元且淡染,胞漿及血管周圍空化,梗死灶周圍炎性細胞浸潤,以第3天表現(xiàn)最明顯.

6、隨著缺血時間增加,梗死灶縮小,神經(jīng)細胞萎縮變性減輕,細胞數(shù)量增加,炎癥反應減輕,z組與C組相比,第7天上述表現(xiàn)更明顯. 4.血漿纖溶活性測定結(jié)果:C組、Z組造模后大鼠血漿PLG、PAI、DD活性顯著升高,與K組相比差異具有非常顯著性(P<0.01),而血漿t-PA活性顯著降低,與K組相比差異具有非常顯著性(P<0.01).Z組與C組相比,血漿PLG、PAI、DD活性較低(P<0.05,P<0.01);血漿t-PA活性較高(P<0

7、.05). 5.腦組織MMP-9免疫組化結(jié)果:MMP-9免疫組化染色以細胞漿呈棕黃色著色為陽性細胞.梗死灶及周圍腦組織發(fā)生MMP-9蛋白表達,以神經(jīng)元表達為主.K組各時間點陽性細胞極少數(shù)表達,C組、Z組各時間點均有不同程度表達(P<0.01),模型復制后第1天即有陽性細胞表達,第3天表達最多(P<0.01),第7天表達最少(P<0.01).而與C組相比,Z組第3、7天陽性細胞表達較少(P<0.05,P<0.01). 6.

8、腦組織MMP-9原位雜交結(jié)果:腦組織MMP-9原位雜交陽性結(jié)果及定位分布基本與免疫組化相似.K組各時間點陽性細胞極少數(shù)表達,C組、Z組各時間點均有不同程度表達(P<0.01),模型復制后第1天即有陽性細胞表達,第3天表達最多(P<0.01),第7天表達最少(P<0.01).而與C組相比,Z組第3、7天陽性細胞表達較少(P<0.05,P<0.01). 結(jié)論：1.逐痰通絡湯能夠促進局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損的恢復、減小梗死體積,減