siRNA抑制Hp vacA和cagA基因表達體外實驗研究.pdf

1、研究背景：幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，Hp)的發(fā)現已徹底地顛覆了人類關于許多種胃腸道疾病的基本理論，使某些胃腸道疾病如慢性、活動性胃炎和消化性潰瘍的病因學和治療學上出現了一場革命，Hp且與胃腺癌和胃粘膜相關性淋巴樣組織淋巴瘤(MALT)密切相關，1994年世界衛(wèi)生組織(WHO)/國際癌癥研究機構(IARC)已將Hp列為Ⅰ類致癌因子。目前，已發(fā)現Hp的毒力因子有多種，其中細胞毒素相關蛋白(cytotoxinassoc

2、iatedantigen，CagA)、細胞空泡毒素(vacuolatingcytotoxin，VacA)與Hp致病性有關，也是目前Hp的研究熱點。 根除Hp在上述消化道疾病中具有十分重要的意義，但目前根除Hp的治療方案服藥次數多、劑量大，單劑藥物根除率低，而使用多聯藥物費用昂貴、治愈率不高且不能有效阻止Hp的再感染和復發(fā)，且耐藥菌株的增加也使抗Hp治療面臨越來越復雜的難題。 雖然Hp全菌疫苗有效，特別是在治療方面具有優(yōu)勢

3、，但有潛在的安全性問題；亞單位疫苗成分明確，具有較好的安全性，但需要安全而強效的粘膜佐劑，要給予足夠高的劑量發(fā)揮佐劑效力，且不能完全避免腹瀉等副作用。雖然有關構建重組疫苗已經做了許多工作，但重組疫苗難以在同一宿主中表達多個抗原，而且很難保證在定居后能穩(wěn)定表達所有抗原。還有一個危險是機體可能產生針對載體的免疫應答，而預先存在的免疫可以阻止疫苗株的定居。雖然對Hp免疫預防已進行了大量研究并取得了令人矚目的成果，但仍有大量問需急待解決。

4、 本研究依據RNAi技術原理，國際標準HpNCTC11637菌株和HpNCTC11639菌株為研究對象，設計針對vacA和cagA基因的siRNA片段，觀察靶向siRNA能否抑制HpvacA和cagA基因表達并觀察Hp培養(yǎng)超濾液對人胃黏膜上皮細胞株(GES-1)的影響。 第一部分：siRNA抑制HpvacA和cagA基因表達體外實驗 目的：優(yōu)化Hp的電轉化條件，觀察siRNA能否抑制HpvacA和cagA基因表達。

5、 結論：體外實驗中，Hp電轉化效率與電場強度和脈沖持續(xù)時間關系密切；siRNA特異抑制HpvacA和cagA基因表達，且與濃度和時間有關。 第二部分：Hp培養(yǎng)超濾液對GES-1的影響 目的：觀察Hp超濾液對GES-1細胞的空泡毒作用和對其增殖、調亡的影響。 結論：體外實驗中，Hp超濾液對GES-1細胞有空泡毒作用，且與Hp超濾液濃度有關；siRNA抑制vacA和cagA表達使Hp超濾液對GES-1細胞空泡毒作