重組人促紅細胞生成素對大鼠視神經保護作用的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文重組人促紅細胞生成素對大鼠視神經保護作用的實驗研究姓名：王輝申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：劉哲麗20080401方 法1 、R G C s 體外培養(yǎng)，分為實驗組( r h E P O 組) 和對照組( D M E M 組) ，倒置顯微鏡下觀察細胞和軸突生長情況，測量細胞最長突起長度進行比較。行G A P 一4 3 的W e s t e r nb l o t 檢測，圖像分析系統(tǒng)對兩組標本進行灰度值測量。結

2、果行t 檢驗。2 、制作大鼠0 N 夾傷模型，分為治療組( r h E P O 組) 和對照組( 生理鹽水組) 。其中治療組按治療劑量不同分為5 U - r h E P O 組、1 5 U - r h E P O 組和5 0 U - r h E P O 組。不同劑量治療組和對照組又按夾傷后處死的時間點不同，分為傷后1 w 、2 w 、4 w 三個時間點。模型制作完成當時立即使用微量進樣器向術眼玻璃體腔內進行注射，不同劑量治療組分別注入5

3、 U 、1 5 U 、5 0 U 的r h E P O ，對照組則注入5 u1 生理鹽水。3 、分別于傷后1 w 、2 w 、4 w 三個時間點處死大鼠摘除眼球，制作5 um 視網膜切片，行T h y l ．1 和G A P 一4 3 免疫組化染色。每張切片分別隨機選取5 個鏡下視野框( 4 0 0 X ) ，采集鏡下圖像，應用圖像分析系統(tǒng)對結果進行分析。計數(shù)T h y l ．1染色陽性細胞數(shù)，測量G A P 一4 3 陽性表達的平均灰

4、度值，結果行方差分析。4 、利用大鼠0 N 夾傷模型，不同組分別于0 N 損傷前、損傷后即時、傷后1 w 、傷后2 w 、傷后4 w 進行F - V E P 檢查，測量P 1 波峰潛時和振幅進行比較，結果行方差分析。結果l 、培養(yǎng)3 d 的R G C s 倒置顯微鏡下觀察，形成典型的細胞突起，r h E P O 組的細胞比對照組胞體更大，突起更長( P ( O ．0 5 ) 。2 、培養(yǎng)3 d 的R G C s 行G A P - 4 3

5、W e s t e r nb l o t 檢測，D M E M 組G A P - 4 3 呈陽性表達，r h E P O 組呈強陽性表達，兩組差異有統(tǒng)計學意義( P < 0 ．0 5 ) 。3 、在大鼠0 N 夾傷模型中，o N 損傷后R G C s 數(shù)量隨時間推移而遞減。在每個時間點，不同劑量r h E P O 治療組的R G C s 數(shù)量均多于對照組( P < O ．0 5 ) ，1 5 U - r h E P O組和5

6、 0 U —r h E P O 組的R G C s 數(shù)量均多于5 U - r h E P O 組( K 0 ．0 5 ) ，而1 5 U - r h E P O 組和5 0U —r h E P O 組之間比較沒有明顯差異( D O ．0 5 ) 。4 、G A P 一4 3 的免疫組化染色：正常大鼠視網膜上未檢測到G A P - 4 3 的陽性表達。在大鼠o N 損傷后1 w 時視網膜上出現(xiàn)G A P - 4 3 較強的陽性表達，主要存