二巰丁二酸藥物代謝動力學基礎、毒性及驅鉛作用研究.pdf

1、[目的] 建立生物樣品中二巰丁二酸的測定方法，研究二巰丁二酸在小鼠體內的組織分布動力學及人體內藥代動力學特征，探討二巰丁二酸急性毒性及驅鉛作用。 [方法] 1．考察二巰丁二酸及其衍生化物的穩(wěn)定性，探討測定的最佳條件，包括反應液pH、反應時間和熒光試劑mBBr的用量，建立生物樣品中二巰丁二酸的測定方法。 2．急性毒性試驗20只昆明小鼠，雌雄各半，體重21.2±2.3g，適應性喂養(yǎng)3天，按體重隨機分為對照組和

2、試驗組，給藥前禁食12h，試驗組每只小鼠于24h內分4次經口給予DMSA 160mg，對照組給予等體積的生理鹽水，觀察1周，然后摘除眼球取血，處死小鼠，取其腦、心臟、肝臟和腎臟，生理鹽水清洗，測定BUN、Scr、AST、ALT、SOD、GSH-PX、MDA及機體必需微量元素等指標。 3．驅鉛試驗60只昆明小鼠，雌雄各半，體重21.3±2.0g，適應性喂養(yǎng)3天，按體重隨機分為對照組(20只，雌雄各半)和試驗組(40只，雌雄各半)，

3、試驗組腹腔注射醋酸鉛1mg.d<'-1>.g<'-1>，對照組給予等量的生理鹽水，持續(xù)1周。染毒結束后，適應性喂養(yǎng)1天，分別將對照組和試驗組小鼠隨機分入Ⅰ、Ⅱ兩大組，各組內有3小組，分別為：A，陰性對照組；B，陽性對照組；C，DMSA治療組。小鼠經口給藥，兩大組給藥頻率及次數(shù)分別為：Ⅰ組治療組給予0.5mL2.6mg.mL<'-1>DMSA溶液，1同3次，連續(xù)3天；Ⅱ組治療組給予0.5mL2.6mg.mL<'-1>DMSA溶液，1日2次

4、，隔同給藥，共10次；其余組給予等量的生理鹽水。小鼠于最后1次給藥后24h摘除眼球取血，處死小鼠，取其腦、心臟、肺臟、肝臟、腎臟、股骨及骨骼肌，測定BUN、Scr、AST、ALT、SOD、GSH-PX、MDA及機體鉛水平和必需微量元素等指標。 4.組織分稚試驗36只昆明小鼠，雌雄各半，體重18.7±1.3g，適應性喂養(yǎng)3天，按體重隨機分為6組(每組6只小鼠，雌雄各半)，1組為空白組，其余5組為給藥組，給藥前禁食12h，自由飲水

5、。給藥組經口給予0.5mL 2.6mg·mL<'-1>DMSA溶液，分別于給藥后0.5、2、4、6和12h摘眼球取血，立即置于肝素化試管；處死小鼠，迅速取其腦、心臟、肺臟、腸、肝臟、脾臟和腎臟，用生理鹽水沖洗血污，并用濾紙吸干表面水分，制備組織勻漿，采用HPLC-熒光檢測技術測定血液及組織中藥物濃度，考察二巰丁二酸組織分布特征。 5.人體藥代動力學試驗 20名男性健康志愿者，體格檢查合格，年齡23.1±1.94歲，體重65.8±

6、6.47kg。志愿者于試驗前一天晚10時后禁食，試驗當日晨抽耿空白血樣和留取空白尿后，立即空腹口服DMSA試驗制劑500mg，200mL溫開水送服。于藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0h取肘靜脈血4mL，分2份置于肝素化試管中，1份立即于-70℃貯存?zhèn)錅y，另1份制備血漿于-70℃貯存?zhèn)錅y。收集藥后0～2 h，2～4 h，4～6 h，6～8 h，8～12h及12～24h全

7、部尿液，記錄每個樣本體積，取10mL于-70℃貯存?zhèn)錅y。采用HPLC-熒光檢測技術測定血液、血漿及尿中原型和總DMSA，評價二巰丁二酸人體藥代動力學特征及其在存在形式。 [結果] 1.DMSA在室溫、自然光下放置迅速氧化，在-20℃冰柜中、避光可以穩(wěn)定存在。當pH值大于5時，衍生化程度最大，本試驗采用pH 8.2。DMSA與mBBr反應迅速，反應5min內即可完成。反應液中mBBr濃度大于DMSA濃度的20倍即可。mBB

8、r-DMSA衍生化物，在pH值1～9范圍內，可以穩(wěn)定存在。 2.急性毒性試驗給予大劑量DMSA，小鼠出現(xiàn)消化道癥狀，進食減少，體重降低，腹腔輕度積水；BUN和Scr水平顯著性升高(P<0.001)，可能對腎臟產生損傷；血氨基轉移酶升高(P<0.001)，肝、腎氨基轉移酶無顯著性變化(P>0.05)，對肝臟存在急性毒性作用；給予大劑量DMSA能抑制機體抗氧化系統(tǒng)，腦組織、肝臟和腎臟SOD活性降低，但無顯著性(P>0.05)：同時錳

9、、銅、鋅等微量元素也有變化，提示SOD活性降低可能與相關元素變化有關。GSH-PX活性明顯降低(P<0.01)，但是機體硒含量變化不明顯(P>0.05)，提示GSH-PX活性降低與組織硒含量無關，可能是DMSA與GSH-PX的巰基反應生成二硫化物所致；大劑量DMSA損傷小鼠肝細胞，肝臟MDA顯著性升高(P<0.01)。 3．驅鉛試驗鉛中毒后BUN、Scr和血氨基轉移酶顯著性升高(P<0.05)，肝臟氨基轉移酶活性顯著性降低(P

10、<0.05)；DMSA治療后，BUN和Scr水平進一步升高，但無顯著性(P>0.05)，可能與DMSA、鉛以及螯合物經腎臟排泄有關，肝功能增強。鉛中毒后機體抗氧化系統(tǒng)受到明顯抑制(P<0.01)，DMSA改善機體抗氧化功能，對肝腎具有保護作用。鉛與機體能的微量元素競爭，導致機體微量元素失衡，特別是錳、銅、鋅等元素水平有所降低，可能與SOD活性降低有關；DMSA能與多種元素螯合，影響機體微量元素水平。 4．組織分布試驗 DMSA在

11、小鼠體內分布動力學研究結果顯示，DMSA分布廣泛，主要分布于腎臟，其次為血液、腸、肺臟、肝臟、脾臟、心臟和腦。DMSA的分布特點表明其對腎臟和肝臟等臟器的損傷較重，主要通過肝腎代謝，腦組織分布較少，但其能有效降低腦鉛水平。血液、腸、肝臟和心臟在給藥后0.5h藥物濃度達峰值，腎臟、肺臟、脾臟和腦于給藥后2h藥物濃度達峰值。 5．人體藥代動力學試驗 DMSA人體藥代動力學參數(shù)：t<,1/2>為7.94±2.10h，C<,max>(為

12、3.77±1.26μg·mL<'-1>，t<,max>為2.45±0.22h，AUC為24.35±7.37)μg·mL<'-1>·h，nAUC為27.63±8.42μg·mL<'-1>·h，aumc為188.24±51.89μg·mL<'-1>，MRT為7.81±0.50h，Ke為0.99±0.70 h<'-1>，Vd為1.10±0.70 L·kg<'-1>，CL為0.33±0.11 L·kg<'-1>·h<'-1>。血液中約有50﹪的

13、DMSA以原型形式存在；血漿中檢測不到原型DMSA，血漿總DMSA用紅細胞比容調整后與血液總DMSA比較，二者之間無顯著性差異(P>0.05)，表明DMSA不進入血細胞；DMSA 24h排泄量占給藥量的30.18﹪～47.74﹪，其中原型僅占排泄量的0.26﹪～1.54﹪，故DMSA大部分經尿排泄，但僅有微量的DMSA以原型排泄。 【結論】 本試驗建立了測定生物樣品中DMSA的方法，該方法簡單易行、省時、準確可靠、重現(xiàn)性

14、好。 口服DMSA后，DMSA迅速吸收，并在體內廣泛分布，主要分布于腎臟，其次為血液、腸、肺臟、肝臟、脾臟、心臟和腦。DMSA的分布特點表明其對腎臟和肝臟等臟器的損傷作用，主要通過肝腎代謝，腦組織分布較少，但能有效降低腦鉛水平。 大劑量的DMSA對肝腎損傷較重，且能抑制機體抗氧化系統(tǒng)的功能，對機體微量元素的平衡有所影響。治療劑量的DMSA，能有效降低機體鉛含量，有保護肝腎的作用，改善鉛中毒引起的機體微量元素失衡，但也可降