NSC348884——Nucleophosmin小分子抑制劑對肝癌細(xì)胞HepG2抑制作用的體外研究.pdf

1、研究背景：原發(fā)性肝癌是世界性最高發(fā)的癌癥之一，早期診斷率低，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多為晚期，因此尋求新型有效的抗肝癌藥物具有重要意義。
　　 Nucleophosmin(又稱NPM、B23、numatrin或者NO38)是主要的核仁磷酸化蛋白，其結(jié)構(gòu)特征包含一個氨基末端保守的寡聚化區(qū)，NPM在細(xì)胞中存在有單體和寡聚體之間的轉(zhuǎn)化。研究表明，NPM的寡聚化可能是調(diào)節(jié)NPM多種功能的必要步驟[3]。此外，許多研究表明NPM在多種腫瘤細(xì)

2、胞和生長期細(xì)胞中的含量明顯高于靜止期細(xì)胞[5]。在分化和凋亡細(xì)胞中，NPM的表達(dá)水平下調(diào)。NPM的高表達(dá)能抑制細(xì)胞凋亡。NPM與腫瘤抑制因子P53直接作用，并能降低其轉(zhuǎn)錄活性。因此NPM可能是一個潛在的原癌基因。
　　 Yun等的最新研究表明，NPM在肝細(xì)胞癌(HCC)中呈高表達(dá)，且顯著高于非癌肝組織；NPM在HCC中的高表達(dá)與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)水平以及血清AFP，肝硬化等臨床預(yù)后參數(shù)相關(guān)；NPM可能是潛在的HCC標(biāo)記物

3、。因此，NPM將可能成為肝癌治療的新靶點。
　　 在自然狀態(tài)下，NPM以寡聚物的形式存在[9,10]。Qi等2008年于Oncogene上首次報道他們通過對NPM分子模型三維結(jié)構(gòu)的研究，確定影響其寡聚物形成的藥效基團(tuán)，然后經(jīng)計算機篩選以及相互作用而確定了一種NPM的小分子抑制劑(SMI)——NSC348884。它能特異性破壞NPM氨基末端的疏水口袋結(jié)構(gòu)，從而抑制NPM寡聚物的形成，破壞其在癌細(xì)胞中的異常功能。他們的研究表明NSC

4、348884以1.7-4.0μM的IC50在多種癌細(xì)胞系中抑制了細(xì)胞的增殖，包括前列腺癌，結(jié)腸癌，乳腺癌，肺癌，淋巴癌。因此，NSC348884將可能成為抗癌治療的新型藥物。
　　 據(jù)Qi等的報道NSC348884對多種癌細(xì)胞的增殖有抑制作用，而NSC348884對肝癌細(xì)胞的作用目前尚無報道，本實驗通過免疫印跡法檢測NSC348884對肝癌細(xì)胞株HepG2中NPM寡聚物的破壞作用，并用MTT法檢測不同濃度藥物對肝癌細(xì)胞株HepG

5、2增殖的抑制作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度藥物誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，而NSC348884誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的機制尚需進(jìn)一步研究。
　　 第一部分、 NSC348884對Nucleophosmin寡聚物向單體轉(zhuǎn)化的作用
　　 目的：探討NSC348884對Nucleophosmin寡聚物向單體轉(zhuǎn)化的作用。
　　 方法：0μM(對照組)，2μM NSC348884(實驗組)分別處理肝癌細(xì)胞HepG2,24小時后用

6、western blot檢測寡聚物和單體的表達(dá)強度變化。
　　 結(jié)果：western blot結(jié)果顯示：實驗組的寡聚物被破壞，而相應(yīng)單體的表達(dá)強度較對照組增高，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：NSC348884能特異性破壞肝癌細(xì)胞HepG2的Nucleophomin寡聚物結(jié)構(gòu)，使其轉(zhuǎn)變?yōu)閱误w。
　　 第二部分、NSC348884對肝癌細(xì)胞HepG2生物學(xué)行為的影響
　　 目的：探討NSC348884對