Genistein和Daidzein抑制肝癌細(xì)胞HepG2增殖的分子機(jī)理研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是全球發(fā)病率和死亡率均較高的惡性腫瘤之一，目前手術(shù)治療切除率低且復(fù)發(fā)率高，而肝癌患者對(duì)毒副反應(yīng)大的化療藥物耐受力差，因此從天然動(dòng)植物中尋找毒性低、療效高的抗癌活性成分成為近年來國內(nèi)外肝癌治療的發(fā)展方向。Genistein和Daidzein是大豆異黃酮的兩種主要成分，二者結(jié)構(gòu)相似且都具有廣泛的生物學(xué)功能。目前對(duì)二者抗腫瘤增殖的研究主要集中在前列腺癌、乳腺癌等性激素依賴性腫瘤方面，而針對(duì)抑制肝癌細(xì)胞增殖的研究較少。本課題以人肝癌細(xì)

2、胞株HepG2為研究對(duì)象，通過MTT分析表明Genistein和Daidzein都可以時(shí)間和劑量依賴的方式抑制肝癌細(xì)胞的增殖。流式細(xì)胞術(shù)和凋亡相關(guān)蛋白檢測(cè)表明，Genistein和Daidzein都可通過引發(fā)周期阻滯(Genistein引發(fā)G2-M期阻滯，Daidzein引發(fā)G1-S期阻滯)和細(xì)胞凋亡，并且二者誘導(dǎo)凋亡作用都與Bc卜2家族蛋白表達(dá)變化相關(guān)。為了進(jìn)一步探討Genistein和Daidzein抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用及其分子機(jī)

3、制，我們從二者對(duì)DNA損傷和端粒酶活性調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路的影響來進(jìn)行研究。 DNA損傷是放療和多種化療藥物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的生物學(xué)基礎(chǔ)，其通過激活細(xì)胞內(nèi)的DNA損傷檢控點(diǎn)系統(tǒng)來引發(fā)周期阻滯和細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。我們采用彗星電泳、免疫印記以及與Caffeine聯(lián)合作用來進(jìn)行分析，結(jié)果表明Genistein和Daidzein都可不同程度地引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的DNA損傷并激活DNA損傷檢控點(diǎn)的多種蛋白，Genistein引

4、發(fā)G2-M期阻滯可能主要通過DNA損傷活化ATM-Chk2-Cdc25C-Cdc2通路來完成，而Daidzein如何通過DNA損傷信號(hào)通路引發(fā)G1-S期阻滯尚不明了。 我們還分析了Genistein和Daidzein對(duì)端粒酶活性的影響。因?yàn)槎肆Ｃ富罨谴蠖鄶?shù)腫瘤細(xì)胞維持端粒長(zhǎng)度并獲得永生化的必要條件，如果某種藥物能抑制端粒酶的活性就可阻斷端粒的合成，從而使細(xì)胞退出增殖周期，達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。本實(shí)驗(yàn)通過TRAP-銀染法檢