

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、利用人胰島素原基因組DNA與山羊乳蛋白調(diào)控序列、增強(qiáng)子序列以及新霉素抗性基因共同組成乳腺特異性表達(dá)載體,將此構(gòu)件轉(zhuǎn)染山羊乳腺上皮細(xì)胞,經(jīng)激素誘導(dǎo)獲得了表達(dá)重組人胰島素的山羊乳腺上皮細(xì)胞系,從而為制備乳腺特異性表達(dá)轉(zhuǎn)基因山羊奠定了基礎(chǔ)。 一、乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建 人胰島素原基因組DNA,以人的全血基因組DNA為模板經(jīng)高保真PCR擴(kuò)增獲得,長(zhǎng)度為1.2Kb,包含信號(hào)肽序列、A、B、C肽鏈序列DNA;β-乳球蛋白(BLG)
2、基因調(diào)控序列,以薩能奶山羊基因組為模板經(jīng)高保真長(zhǎng)PCR擴(kuò)增獲得,其中5'端長(zhǎng)度為4.2Kb,3'端長(zhǎng)度為1.8Kb;增強(qiáng)子序列為600bp左右,富含細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)DNA序列以及NEOr新霉素抗性基因。通過(guò)以上元件,成功構(gòu)建了奶山羊β-乳球蛋白調(diào)控序列及增強(qiáng)子序列共同指導(dǎo)人胰島素原基因乳腺特異性表達(dá)載體BIC13。 二、山羊乳腺上皮細(xì)胞系的建立與藥物篩選 采用膠原酶和透明質(zhì)酸酶消化法從處于泌乳狀態(tài)的薩能奶山羊的乳腺組
3、織中分離得到原代乳腺上皮細(xì)胞,將乳腺特異性表達(dá)載體片段BLG5'-Enhancer-hPI-NEOr-BLG3'(9.7Kb)電轉(zhuǎn)染入第四代奶山羊乳腺上皮細(xì)胞,經(jīng)含400μg/mlG418的篩選培養(yǎng)液篩選三周后,得到10個(gè)有抗性的細(xì)胞株。提取細(xì)胞基因組,經(jīng)PCR擴(kuò)增表明,其中有6個(gè)細(xì)胞株成功轉(zhuǎn)染了外源基因。 三、陽(yáng)性乳腺上皮細(xì)胞系的誘導(dǎo)表達(dá)與檢測(cè) 對(duì)轉(zhuǎn)染有外源基因的細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),同時(shí)用催乳素誘導(dǎo)表達(dá),48小時(shí)后提取
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 山羊BLG調(diào)控序列及CMV增強(qiáng)子指導(dǎo)人胰島素原基因在細(xì)胞和小鼠中表達(dá).pdf
- 增強(qiáng)子對(duì)提高山羊β-酪蛋白調(diào)控序列指導(dǎo)人乳鐵蛋白基因在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺中特異性表達(dá)水平的研究.pdf
- 增強(qiáng)子、絕緣子和β-乳球蛋白調(diào)控序列啟動(dòng)功能基因在山羊乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)的影響.pdf
- 大鼠胰島素原基因編碼序列的克隆及表達(dá).pdf
- 酪蛋白-巨細(xì)胞病毒(CMV)復(fù)合啟動(dòng)-增強(qiáng)子指導(dǎo)人乳鐵蛋白cDNA表達(dá)的研究.pdf
- RNA序列、位置及短序列增強(qiáng)子突變影響報(bào)告基因表達(dá).pdf
- 基于深度學(xué)習(xí)的增強(qiáng)子調(diào)控序列識(shí)別研究.pdf
- 人胰島素原基因非β細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf
- 含可調(diào)控人胰島素原基因質(zhì)粒的包裝增殖及鑒定.pdf
- 山羊β-乳球蛋白調(diào)控元件-人乳鐵蛋白cDNA融合基因的構(gòu)建、細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)基因克隆山羊的獲得.pdf
- 基于組蛋白修飾信息和DNA序列預(yù)測(cè)增強(qiáng)子的研究.pdf
- 人胰島素原基因非β細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與包裝.pdf
- 強(qiáng)力霉素調(diào)控的重組人胰島素原基因載體的構(gòu)建及體外表達(dá)研究.pdf
- 短序列增強(qiáng)子和Alu重復(fù)序列影響基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究和生物信息學(xué)分析.pdf
- 人胰島素原基因的設(shè)計(jì)克隆及在大腸桿菌中的表達(dá).pdf
- 山羊BLG-CMV調(diào)控序列指導(dǎo)hLF基因在細(xì)胞及轉(zhuǎn)基因小鼠中表達(dá).pdf
- 酪蛋白調(diào)控序列指導(dǎo)下的人乳鐵蛋白基因在動(dòng)物乳腺中表達(dá)特性的研究.pdf
- 山羊卵泡抑素(Follistatin)基因cDNA克隆、序列分析及組織表達(dá)研究.pdf
- 含突變?nèi)艘葝u素原基因質(zhì)粒的包裝及病毒滴度測(cè)定.pdf
- 人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3基因編碼序列的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá).pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論