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1、卵泡抑素(Follistatin,F(xiàn)S),是一種富含半胱氨酸的糖基化單鏈多肽,對(duì)促卵泡素(Follicle-stimulating hormone,F(xiàn)SH)具有較強(qiáng)的抑制作用,因此又稱為FSH抑制蛋白。FS有多種形式,其mRNA在動(dòng)物體內(nèi)多種組織和器官中均有表達(dá)。FS作為活化素(Activin,ACT)的結(jié)合蛋白,可通過FS/ACT系統(tǒng)來調(diào)節(jié)動(dòng)物的生殖活動(dòng)。
目前國(guó)內(nèi)外尚無山羊FS基因cDNA的克隆研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以薩能奶
2、山羊(n=7)、大足黑山羊(n=7)和南江黃羊(n=7)為研究對(duì)象,參考GenBank中綿羊(Ovis aries)(M63123.1)和牛(Bos Taurus)(NM_175801.2)FSmRNA序列設(shè)計(jì)特異性引物,通過RT-PCR方法克隆了三個(gè)山羊品種(遺傳資源)的FS基因cDNA序列,用相關(guān)軟件分析了其核苷酸、氨基酸序列及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu);并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了FS基因在不同組織中表達(dá)水平。主要研究結(jié)果如下:
3、1、從山羊卵巢組織克隆獲得薩能奶山羊、大足黑山羊和南江黃羊三個(gè)山羊品種(遺傳資源)FS基因編碼區(qū)全序列(GenBank登錄號(hào):HM138664~HM138666),長(zhǎng)為1217 bp,ORF位于162~1196 bp,長(zhǎng)為1035 bp,編碼344個(gè)氨基酸,5’非編碼區(qū)為25 bp,3’非編碼區(qū)為158 bp。包含29個(gè)氨基酸信號(hào)肽,1006個(gè)氨基酸成熟肽。編碼區(qū)編碼的氨基酸與GenBank中其它哺乳動(dòng)物的氨基酸同源性達(dá)93%以上。
4、r> 2、薩能奶山羊、大足黑山羊和南江黃羊FS分子量分別為37.942 KDa、37.801KDa和37.900 KDa;等電點(diǎn)(pI)分別為5.85、6.07和6.07;疏水性最小值分別為-3.500、-3.500和-3.156,最大值都是3.511。三者均無蛋白跨膜區(qū);蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)中,α螺旋分別占16.57%、15.99%和20.06%,β轉(zhuǎn)角分別占4.94%、4.65%和2.91%,延伸鏈分別占17.15%、18.02%和
5、15.12%,無規(guī)卷曲分別占61.34%、61.34%:gl61.92%。
3、通過比較不同品種山羊(遺傳資源)與其他哺乳動(dòng)物FS基因編碼區(qū)序列,發(fā)現(xiàn)山羊FS基因cDNA序列出現(xiàn)了3個(gè)突變位點(diǎn),其中轉(zhuǎn)換為2,顛換為1,引起氨基酸變異的位點(diǎn)有2個(gè)。大足黑山羊FS基因共有2個(gè)堿基位點(diǎn)發(fā)生變異,其中1025 bp處(C→T)的突變?yōu)闊o義突變,700 bp處(T→G),引起纈氨酸(V)→甘氨酸(G)。南江黃羊FS基因有1個(gè)堿基發(fā)生
6、突變,613 bp處(A→G),引起引起谷氨酸(E)→甘氨酸(G)。
4、應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)山羊FS基因定量表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):該基因在不同品種山羊的心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟,卵巢和垂體中都能檢測(cè)到。同一品種山羊不同組織中FS基因表達(dá)水平存在差異。不同品種山羊在脾臟、腎臟和垂體中FS基因表達(dá)水平差異均不顯著(P>0.05),在肺、肝臟和心臟中FS基因表達(dá)水平差異極顯著(P<0.01),在卵巢中FS基因表達(dá)水平
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