山羊卵泡抑素(Follistatin)基因cDNA克隆、序列分析及組織表達(dá)研究.pdf

1、卵泡抑素(Follistatin，F(xiàn)S)，是一種富含半胱氨酸的糖基化單鏈多肽，對(duì)促卵泡素(Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)具有較強(qiáng)的抑制作用，因此又稱為FSH抑制蛋白。FS有多種形式，其mRNA在動(dòng)物體內(nèi)多種組織和器官中均有表達(dá)。FS作為活化素(Activin，ACT)的結(jié)合蛋白，可通過(guò)FS/ACT系統(tǒng)來(lái)調(diào)節(jié)動(dòng)物的生殖活動(dòng)。
　　 目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)山羊FS基因cDNA的克隆研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以薩能奶

2、山羊(n=7)、大足黑山羊(n=7)和南江黃羊(n=7)為研究對(duì)象，參考GenBank中綿羊(Ovis aries)(M63123.1)和牛(Bos Taurus)(NM＿175801.2)FSmRNA序列設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)RT-PCR方法克隆了三個(gè)山羊品種(遺傳資源)的FS基因cDNA序列，用相關(guān)軟件分析了其核苷酸、氨基酸序列及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)；并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了FS基因在不同組織中表達(dá)水平。主要研究結(jié)果如下：
　　

3、1、從山羊卵巢組織克隆獲得薩能奶山羊、大足黑山羊和南江黃羊三個(gè)山羊品種(遺傳資源)FS基因編碼區(qū)全序列(GenBank登錄號(hào)：HM138664～HM138666)，長(zhǎng)為1217 bp，ORF位于162～1196 bp，長(zhǎng)為1035 bp，編碼344個(gè)氨基酸，5’非編碼區(qū)為25 bp，3’非編碼區(qū)為158 bp。包含29個(gè)氨基酸信號(hào)肽，1006個(gè)氨基酸成熟肽。編碼區(qū)編碼的氨基酸與GenBank中其它哺乳動(dòng)物的氨基酸同源性達(dá)93％以上。

4、r>　　 2、薩能奶山羊、大足黑山羊和南江黃羊FS分子量分別為37.942 KDa、37.801KDa和37.900 KDa；等電點(diǎn)(pI)分別為5.85、6.07和6.07；疏水性最小值分別為-3.500、-3.500和-3.156，最大值都是3.511。三者均無(wú)蛋白跨膜區(qū)；蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)中，α螺旋分別占16.57％、15.99％和20.06％，β轉(zhuǎn)角分別占4.94％、4.65％和2.91％，延伸鏈分別占17.15％、18.02％和

5、15.12％，無(wú)規(guī)卷曲分別占61.34％、61.34％：gl61.92％。
　　 3、通過(guò)比較不同品種山羊(遺傳資源)與其他哺乳動(dòng)物FS基因編碼區(qū)序列，發(fā)現(xiàn)山羊FS基因cDNA序列出現(xiàn)了3個(gè)突變位點(diǎn)，其中轉(zhuǎn)換為2，顛換為1，引起氨基酸變異的位點(diǎn)有2個(gè)。大足黑山羊FS基因共有2個(gè)堿基位點(diǎn)發(fā)生變異，其中1025 bp處(C→T)的突變?yōu)闊o(wú)義突變，700 bp處(T→G)，引起纈氨酸(V)→甘氨酸(G)。南江黃羊FS基因有1個(gè)堿基發(fā)生

6、突變，613 bp處(A→G)，引起引起谷氨酸(E)→甘氨酸(G)。
　　 4、應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)山羊FS基因定量表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：該基因在不同品種山羊的心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟，卵巢和垂體中都能檢測(cè)到。同一品種山羊不同組織中FS基因表達(dá)水平存在差異。不同品種山羊在脾臟、腎臟和垂體中FS基因表達(dá)水平差異均不顯著(P>0.05)，在肺、肝臟和心臟中FS基因表達(dá)水平差異極顯著(P<0.01)，在卵巢中FS基因表達(dá)水平