脆性基因FHIT與WWOX在乳腺癌中表達(dá)的研究.pdf

1、乳腺癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤的首位，且以1％的速度逐年升高。乳腺癌發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移的機制成為國內(nèi)外研究熱點。隨著對乳腺癌生物學(xué)行為的深入了解，人們已經(jīng)認(rèn)識到乳腺癌的發(fā)生發(fā)展均源自基因水平的改變。近年研究認(rèn)為，DNA損傷是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制，染色體脆性位點抑癌基因?qū)NA損傷高度敏感。 FHIT基因是1996年Ohta<'[1]>等以外顯子捕獲法(exon trapping experiment)在染色體3 P 1 4.2

2、區(qū)定位的一個基因，屬于組氨酸三聯(lián)體(histindine triad，HIT)基因家族。因易于斷裂，故命名為脆性三聯(lián)組氨酸基因(FHIT)，在染色體上占據(jù)1 Mb大小的位置，覆蓋FRA3B脆性位點。FRA3B脆性位點是最先發(fā)現(xiàn)的較活躍的脆性位點。wwox基因是2000年由Bednarek<'[2]>等應(yīng)用鳥槍基因測序技術(shù)對相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄子進行分析而分離鑒定出的一個新基因，它位于染色體16q23.3-24.1區(qū)域，并跨越常見染色體脆性位點FR

3、Al6D。FRAl6D是第二個發(fā)現(xiàn)的較活躍的脆性位點，其覆蓋的DNA序列長約2.0Mb，WWOX基因長約1.0Mb。 FHIT基因和WWOX基因作為較早確定且與脆性位點相聯(lián)系的抑癌基因，在抑癌基因家族中地位舉足輕重。大量文獻(xiàn)證實FHIT基因和WWOX基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。本文旨在探討： 1、FHIT基因和WWOX基因在人乳腺癌組織中的表達(dá)特點及其表達(dá)水平的變化與乳腺癌臨床、病理等因素的關(guān)

4、系，從而為乳腺癌的診斷、預(yù)后判斷及治療方案選擇提供理論依據(jù)。 2、觀察分析不同乳腺癌細(xì)胞系中FHIT及WWOXmRNA表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行第一部分：FHIT與WWOX基因的mRNA在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義 目的 觀察乳腺癌組織中FHIT與WWOX基因的mRNA表達(dá)情況，并探討其與臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系。 方法：以逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測5l例乳腺癌及癌旁組織標(biāo)本中染色體脆性位點抑癌基因FH

5、IT與WWOXI的mRNA表達(dá)，半定量分析電泳結(jié)果。以免疫組化法檢測乳腺癌石蠟標(biāo)本中的雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和HER-2基因狀態(tài)。 結(jié)果：51例配對標(biāo)本中，WWOX基因的mRNA表達(dá)在乳腺癌組織及癌旁非癌乳腺組織中差異有顯著性(P<0.01)；FHIT基因的mRNA表達(dá)在乳腺癌組織及癌旁非癌乳腺組織中差異有顯著性(P<0.01)。FHIT與WWOXmRNA在腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r<,s>=0.306，P<0

6、.05)，F(xiàn)HIT與WWOXmRNA在乳腺癌組織中的低表達(dá)亦呈正相關(guān)(r<,s>=0.354，P<0.05)。FHIT與WWOX mRNA的表達(dá)與臨床病理分期有關(guān)(P<0.05)，WWOX mRNA的表達(dá)與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論FHIT與WWOX基因系重要的候選抑瘤基因，與其他預(yù)后指標(biāo)的聯(lián)合檢測可望對患者的治療預(yù)后作出更準(zhǔn)確的預(yù)測。第二部分：不同乳腺癌細(xì)胞系FHIT及WWOXmRNA表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為的

7、關(guān)系 目的檢測FHIT基因、WWOX基因在乳腺癌MCF-7細(xì)胞株、MCF-7/Adr細(xì)胞株、MDA-MB-231細(xì)胞株及MDA-MB-435S細(xì)胞株中的表達(dá)水平，并探討其意義 方法：常規(guī)培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇乳腺癌MCF-7細(xì)胞株、MCF-7/Adr細(xì)胞株、MDA-MB-231細(xì)胞株及MDA-MB-435S細(xì)胞株，以逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測各細(xì)胞株中FHIT基因、WWOX基因的Mrna表達(dá)，半定量分

8、析電泳結(jié)果。結(jié)果1、MCF-7細(xì)胞中WWOXmRNA和FHITmRNA表達(dá)較高；而MCF-7/Adr細(xì)胞中WWOXmRNA和FHITmRNA表達(dá)水平較MCF-7細(xì)胞降低。 2、MDA-MB-231細(xì)胞中WWOXmRNA失表達(dá)，F(xiàn)HITmRNA弱表達(dá)；MDA-MB-435細(xì)胞WWOXmRNA和FHITmRNA均失表達(dá)； 結(jié)論1、MCF-7/Adr細(xì)胞惡性程度的增強機制可能與WWOXmRNA和FHITmRNA失表達(dá)