RASSF2A基因的乳腺癌中表達(dá)及異常甲基化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　在許多癌癥中，腫瘤抑制基因RASSF2A由于其啟動(dòng)子的甲基化而失活，本實(shí)驗(yàn)的研究目的是對(duì)于RASSF2A基因在乳腺癌中表達(dá)及異常甲基化的探究。
　　方法:
　　(1)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)2株人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-231和1株正常乳腺上皮細(xì)胞系HBL-100中RASSF2A基因mRNA表達(dá)水平，以及這2株人乳腺癌細(xì)胞系在不同濃度去甲基化藥物5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷(5-Aza

2、-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)連續(xù)處理5天前后RASSF2A基因mRNA表達(dá)水平變化;同時(shí)運(yùn)用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR，MSP)技術(shù)對(duì)這2株人乳腺癌細(xì)胞和1株正常乳腺上皮細(xì)胞RASSF2A基因甲基化狀態(tài)進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)分析。(2)收取42例乳腺癌及其癌旁正常組織標(biāo)本，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和MSP技術(shù)分別檢測(cè)RASSF2A表達(dá)水平和其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)，分析RASSF2

3、A甲基化與乳腺癌主要臨床病理特征參數(shù)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和MDA-MB-231中RASSF2AmRNA表達(dá)水平降低，其中MCF-7的表達(dá)水平更低，與正常乳腺上皮細(xì)胞系中該基因表達(dá)水平相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P1=0.000; P2=0.000）;MSP結(jié)果證實(shí)這2株癌細(xì)胞系的RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)域均存在完全甲基化，而正常乳腺上皮細(xì)胞未出現(xiàn)甲基化改變;但經(jīng)5-Aza-CdR去甲基化處理3天后，乳腺

4、癌細(xì)胞系RASSF2A mRNA表達(dá)水平又開始升高，并在一定程度上存在時(shí)間和劑量的依賴性，尤以MCF-7為明顯。這說明在MCF-7和MDA-MB-231中，RASSF2A基因表達(dá)異常是甲基化修飾致基因表達(dá)沉默的結(jié)果。針對(duì)臨床42例乳腺癌組織標(biāo)本的驗(yàn)證研究顯示，RASSF2AmRNA在癌組織的表達(dá)水平較癌旁正常組織明顯降低（P=0.016），其中17(17/42)例低表達(dá)者乳腺癌組織表現(xiàn)為RASSF2A啟動(dòng)子甲基化，而相匹配的42例癌旁正

5、常乳腺組織中均未檢測(cè)到RASSF2A啟動(dòng)子甲基化(P=0.000)。乳腺癌中RASSF2A啟動(dòng)子甲基化與病人的年齡、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、TNM分期、ER、PR和Her2狀態(tài)、以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性均無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　在人乳腺癌細(xì)胞系和乳腺癌癌組織中RASSF2A mRNA表達(dá)水平降低，其原因經(jīng)體外細(xì)胞學(xué)研究證實(shí)與該基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化密切相關(guān);進(jìn)一步臨床組織標(biāo)本的研究也表明癌組