RASSF2A基因的乳腺癌中表達及異常甲基化的實驗研究.pdf

1、目的:
　　在許多癌癥中，腫瘤抑制基因RASSF2A由于其啟動子的甲基化而失活，本實驗的研究目的是對于RASSF2A基因在乳腺癌中表達及異常甲基化的探究。
　　方法:
　　(1)利用實時熒光定量PCR技術檢測2株人乳腺癌細胞系MCF-7、MDA-MB-231和1株正常乳腺上皮細胞系HBL-100中RASSF2A基因mRNA表達水平，以及這2株人乳腺癌細胞系在不同濃度去甲基化藥物5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷(5-Aza

2、-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)連續(xù)處理5天前后RASSF2A基因mRNA表達水平變化;同時運用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR，MSP)技術對這2株人乳腺癌細胞和1株正常乳腺上皮細胞RASSF2A基因甲基化狀態(tài)進行對比檢測分析。(2)收取42例乳腺癌及其癌旁正常組織標本，利用實時熒光定量PCR和MSP技術分別檢測RASSF2A表達水平和其啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)，分析RASSF2

3、A甲基化與乳腺癌主要臨床病理特征參數之間的關系。
　　結果:
　　人乳腺癌細胞系MCF-7和MDA-MB-231中RASSF2AmRNA表達水平降低，其中MCF-7的表達水平更低，與正常乳腺上皮細胞系中該基因表達水平相比有統(tǒng)計學差異（P1=0.000; P2=0.000）;MSP結果證實這2株癌細胞系的RASSF2A啟動子區(qū)域均存在完全甲基化，而正常乳腺上皮細胞未出現甲基化改變;但經5-Aza-CdR去甲基化處理3天后，乳腺

4、癌細胞系RASSF2A mRNA表達水平又開始升高，并在一定程度上存在時間和劑量的依賴性，尤以MCF-7為明顯。這說明在MCF-7和MDA-MB-231中，RASSF2A基因表達異常是甲基化修飾致基因表達沉默的結果。針對臨床42例乳腺癌組織標本的驗證研究顯示，RASSF2AmRNA在癌組織的表達水平較癌旁正常組織明顯降低（P=0.016），其中17(17/42)例低表達者乳腺癌組織表現為RASSF2A啟動子甲基化，而相匹配的42例癌旁正

5、常乳腺組織中均未檢測到RASSF2A啟動子甲基化(P=0.000)。乳腺癌中RASSF2A啟動子甲基化與病人的年齡、腫瘤大小、腫瘤分級、TNM分期、ER、PR和Her2狀態(tài)、以及腋窩淋巴結轉移等臨床病理指標的相關性均無顯著相關性(P＞0.05)。
　　結論:
　　在人乳腺癌細胞系和乳腺癌癌組織中RASSF2A mRNA表達水平降低，其原因經體外細胞學研究證實與該基因啟動子區(qū)域甲基化密切相關;進一步臨床組織標本的研究也表明癌組