睪酮對急性心肌梗死大鼠心臟創(chuàng)傷修復的影響.pdf

1、本研究在行去勢術(shù)的雄性SD大鼠MI后6小時開始應用大、小劑量PT，在系統(tǒng)評價T對肝腎、血脂水平等影響的基礎(chǔ)上，觀察其對AMI后心室重構(gòu)和神經(jīng)重構(gòu)的影響，并觀察不同劑量T對MI后心功能不全時心肌興奮收縮耦聯(lián)的中心環(huán)節(jié)RYR2蛋白及其磷酸化水平、FKBP12.6蛋白表達的影響。力求較為全面地了解T對AMI的影響及其病理生理和分子機理。 方法：建立雄性SD大鼠的去勢心梗模型，并給予大、小劑量PT及安慰劑治療，隨機分為5組：S-Cas+

2、MI+P組(n=6)、Cas+S-MI+P組(n=6)、Cas+MI+P組(n=11)、Cas+MI+T組(n=13)、Cas+MI+t組(n=12)，觀察6周，記錄大鼠死亡例數(shù)。隨后行血流動力學檢查，測量BP、LVEDP、LV±dp/dtmax，處死大鼠進行心臟稱重并留取組織、血液標本，觀察左房血栓情況，測定血清TC、TG、HDL、LDL、GPT、Cr、NE、ANP及T水平。上部分心室組織進行石蠟包埋切片，進行HE染色、天狼猩紅－偏振

3、光染色、TH免疫組化染色。下部分心室組織進行冰凍勻漿，通過Westernblotting測定RYR2蛋白、磷酸化RYR2蛋白及FKBP12.6蛋白的表達水平。 結(jié)果：模型可靠性：Cas+MI+P組、Cas+MI+T組及Cas+MI+t組的心肌梗死范圍分別為(47.6±5.0％，49.7±3.3％，，46.2±3.3％，P＞0.05)，此三組間無統(tǒng)計學差異。S-Cas+MI+P組心肌梗死范圍(48.2±2.8％)與Cas+MI+P

4、組相比亦無統(tǒng)計學差異。血清T水平Cas+MI+T組、Cas+MI+t組、S-Cas+MI+P組分別為(138.15±13.62ng/ml，40.45±11.13ng/ml，1.78±0.09ng/ml)。Cas+MI+P組與Cas+S-MI+P組大鼠由于接受去勢術(shù)，其血清T水平幾乎為零。 心肌膠原組織變化：去勢大鼠發(fā)生MI后，其非梗死區(qū)CVF顯著低于未發(fā)生心梗者(8.0±2.1％，17.2±4.9％，P＜0.01)。Cas+MI

5、+P組與S-Cas+MI+P組梗死區(qū)Ⅰ型膠原面積、Ⅲ型膠原面積及Ⅰ型/Ⅲ型膠原比值無統(tǒng)計學差異，但非梗死區(qū)Cas+MI+P組膠原CVF顯著低于S-Cas+MI+P組(8.0±2.1％，13.4±5.7％，P＜0.01)。Cas+MI+T組與Cas+MI+P組相比，梗死區(qū)Ⅲ型膠原含量顯著增多(104044.2±55743.8，49576.0±28226.2，P＜0.01)，Ⅰ型膠原含量顯著降低(273850.6±67188.1，39327

6、8.8±74650.1，P＜0.01)，Ⅰ、Ⅲ型膠原含量比值顯著倒置。但Cas+MI+T組與Cas+MI+P組相比，對于非梗死區(qū)CVF的影響無統(tǒng)計學差異。Cas+MI+t組與Cas+MI+P組相比，梗死區(qū)Ⅲ型膠原含量顯著降低(23491.6±12439.1，49576.0±28226.2，P＜0.01)，而對Ⅰ型膠原含量無顯著性影響，Ⅰ、Ⅲ型膠原含量比值升高(18.3±8.5，12.3±10.7，P=0.25)，但未達到統(tǒng)計學意義。Ca

7、s+MI+t組與Cas+MI+P組相比，使非梗死區(qū)CVF顯著增加。Cas+MI+t組與Cas+MI+T組相比，梗死區(qū)Ⅲ型膠原含量顯著降低，Ⅰ型膠原含量顯著增多，Ⅰ、Ⅲ型膠原含量比值顯著性升高(P＜0.01)。 體重及心室重量變化：Cas+MI+P組、Cas+MI+T組及Cas+MI+t組給藥前各組間體重無統(tǒng)計學差異。給藥后6周，Cas+MI+T組體重顯著性低于Cas+MI+P組(P＜0.01)，Cas+MI+P組與Cas+MI+

8、t組間體重無顯著性差異。Cas+MI+P組、Cas+MI+T組、Cas+MI+t組體重增長量分別為(74.00±18.97g，34.70±25.40g，69.82±15.38g)，可見Cas+MI+T組體重增長量顯著低于Cas+MI+P組及Cas+MI+t組。Cas+MI+P組與Cas+MI+t組間體重增長量無顯著性差異。Cas+MI+P組與S-Cas+MI+P組間相對心室重量、相對左室重量、相對右室重量、右室比左室重量均無統(tǒng)計學差異。

9、Cas+MI+P組的相對心室重量、相對右室重量、右室比左室重量均顯著性高于Cas+S-MI+P(P＜0.01)，相對左室重量兩組間無統(tǒng)計學差異。Cas+MI+P組、Cas+MI+T組及Cas+MI+t組間相對心室重量、相對右室重量、右室比左室重量均無有統(tǒng)計學意義的差異。相對左室重量除Cas+MI+t組顯著性高于Cas+MI+P組(2.42±0.23mg/g，2.15±0.18mg/g，P＜0.01)以外，在其余各組間均無統(tǒng)計學差異。去勢

10、與假去勢大鼠發(fā)生MI后6周梗死區(qū)室壁厚度無顯著性差異，去勢心梗大鼠肌注大、小劑量PT后對梗死區(qū)室壁厚度亦無顯著性影響。去勢大鼠MI后MCSA顯著增大(275.09±15.10um2，200.50±14.42um2，P＜0.01)，去勢心梗大鼠給予小劑量PT后MCSA(319.78±52.42um2)較安慰劑組顯著增大。 血流動力學變化：去勢大鼠MI后SBP、DBP均顯著性降低，LVEDP顯著增高，LV+dp/dtmax與LV-d

11、p/dtmax顯著降低。去勢與假去勢大鼠發(fā)生MI后：LVEDP、LV+dp/dtmax與LV-dp/dtmax均無統(tǒng)計學差異。去勢心梗大鼠給予大、小劑量PT后較安慰劑組相比，LVEDP顯著性降低(P＜0.01)，LV-dp/dtmax雖升高(5765.6±1342.9mmHg/s，5678.0±1078.5mmHg/svs4696.7±1538.4mmHg/s)，但差異無統(tǒng)計學顯著性。給予小劑量PT與安慰劑相比，LV+dp/dtmax顯

12、著升高，大小劑量間無統(tǒng)計學差異。 血清指標變化：各組大鼠盡管給予不同干預，但血清GPT、Cr水平均在正常范圍內(nèi)，未見有臨床意義的增高或降低。去勢大鼠MI后血清ANP水平較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.01)。去勢與假去勢大鼠均發(fā)生MI后，血清ANP水平無顯著性差異。去勢心梗大鼠給予PT治療后較安慰劑組血清ANP水平顯著性降低(0.93±0.14pg/ml，0.81±0.14pg/mlvs1.31±0.42pg/ml，P＜0.05)，

13、但大小劑量間無統(tǒng)計學差異。去勢大鼠MI后血清NE水平顯著升高(7.21±0.63ng/ml，1.78±0.21ng/ml，P＜0.01)。給予PT治療后血清NE水平顯著降低，并接近未梗死去勢大鼠水平(2.02±0.49ng/ml，3.37±0.56ng/mlvs7.21±0.63ng/ml，P＜0.01)。大小劑量間血清NE水平無顯著性差異。 交感神經(jīng)分布變化：去勢大鼠發(fā)生AMI6周后非梗死區(qū)交感神經(jīng)分布面密度顯著性降低(157

14、1.3±395.1um2/mm2，2964.0±1141.2um2/mm2，P＜0.01)。去勢和假去勢大鼠發(fā)生AMI6周后，梗死區(qū)與非梗死區(qū)TH免疫組化染色顯示交感神經(jīng)分布面密度、離散度均無統(tǒng)計學差異。去勢心梗大鼠給予大、小劑量PT治療后與安慰劑組相比，梗死區(qū)交感神經(jīng)分布面密度顯著性增高(7302.0±4962.6um2/mm2，9701.2±5859.7um2/mm2vs2647.8±1286.5um2/mm2，P＜0.05)，而在

15、非梗死區(qū)差異無統(tǒng)計學顯著性，P＞0.05。從而使MI后交感神經(jīng)分布離散度顯著增加(6014.0±4385.1um2/mm2，6663.6±1094.9um2/mm2vs712.5±370.9um2/mm2，P＜0.05)。大小劑量間在心肌梗死區(qū)與非梗死區(qū)交感神經(jīng)分布面密度、離散度均無統(tǒng)計學差異。 RYR2及FKBP12.6蛋白變化：去勢大鼠發(fā)生心梗后FKBP12.6、RYR2蛋白表達顯著減低，磷酸化RYR2蛋白、RYR2相對磷酸

16、化比值顯著增高(P＜0.01)，去勢大鼠較假去勢大鼠發(fā)生MI后，磷酸化RYR2蛋白表達及RYR2相對磷酸化比值顯著性增高(P＜0.01)。去勢心梗大鼠給予PT治療后與安慰劑相比，大、小劑量PT均使心肌RYR2蛋白表達顯著升高，磷酸化RYR2蛋白表達及RYR2相對磷酸化比值顯著性降低，大劑量PT還使FKBP12.6蛋白表達水平顯著增高，而小劑量PT則無此作用。大、小劑量間比較，大劑量組RYR2、FKBP12.6蛋白表達水平更高。

17、結(jié)論：T治療使去勢大鼠MI后6周死亡率顯著降低。小劑量T治療使相對左室重量及MCSA顯著增加，并且使梗死區(qū)Ⅰ、Ⅲ膠原比例增高，具有促進梗死區(qū)膠原修復的趨勢；而大劑量T治療對心室重量及MCSA無顯著影響，使梗死區(qū)Ⅰ、Ⅲ膠原比例顯著降低，使梗死區(qū)膠原組織修復延遲，并且提示T治療具有劑量依賴性。T可促進梗死區(qū)周圍交感神經(jīng)再生，使去勢大鼠MI后交感神經(jīng)分布的異質(zhì)性增加，但卻使NE水平降低。大鼠MI后FKBP12.6蛋白表達減低，RYR2蛋白表達