黃芩莖葉總黃酮對泡沫細(xì)胞形成的影響.pdf

1、本研究旨在(1)用人類單核腫瘤細(xì)胞株U937建立新型泡沫細(xì)胞模型；(2)黃芩莖葉總黃酮(TF)對單核細(xì)胞生長的影響；(3)TF對泡沫細(xì)胞形成的影響。進(jìn)而初步探索黃酮抗動脈硬化的機制，并為開發(fā)利用承德豐富的黃芩資源提供理論依據(jù)。 研究方法：(1)為了建立U937巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型，8瓶U937細(xì)胞分成對照組4瓶和模型組4瓶，細(xì)胞密度106個/ml，對照組細(xì)胞培養(yǎng)液中含胎牛血清(FCS)10％、LDL100mg/L，模型組培養(yǎng)

2、液中另加佛波酯(PMA)100μg/L，37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)72小時，收集細(xì)胞涂片用油紅O染色觀察細(xì)胞形態(tài)，并測定細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量；(2)為了觀察TF對U937細(xì)胞生長的影響，取2塊24孔板，每孔中接種U937細(xì)胞5×104個/ml，培養(yǎng)液中含10％FCS和不同濃度的TF，根據(jù)TF濃度不同分為六組，分別是TF0mg/L、TF25mg/L、TF50mg/L、TF100mg/L、TF150mg/L、TF200mg/L組，每組接

3、種8孔，37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)7天，在此期間每24小時一次測定每孔的細(xì)胞密度，繪制細(xì)胞生長曲線。第7天測定細(xì)胞懸液中乳酸脫氫酶(LDH)的活性；(3)為了觀察TF對泡沫細(xì)胞形成的影響，取2塊24孔板，每孔中接種U937細(xì)胞2.5×106個/ml，培養(yǎng)液中含F(xiàn)CS10％、LDL100mg/L、PMA100μg/L和不同濃度的TF，根據(jù)TF濃度不同分為六組，分別是TF0mg/L、TF25mg/L、TF50mg/L、TF100mg/

4、L、TF150mg/L、TF200mg/L組，每組8孔，37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)72小時，收集培養(yǎng)細(xì)胞測定細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TCH)含量和蛋白質(zhì)定量，細(xì)胞涂片油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況，并測定細(xì)胞培養(yǎng)液中Ox-LDL的濃度。 研究結(jié)果：(1)模型組細(xì)胞內(nèi)大量油紅O染色陽性的脂質(zhì)顆粒，而對照組細(xì)胞形態(tài)無變化，細(xì)胞內(nèi)無脂質(zhì)顆粒。模型組細(xì)胞內(nèi)TCH520.13±37.52mg/g蛋白，高于對照組39.47±9.26mg/g

5、蛋白，兩組差別有顯著性(t=35.18p＜0.001)。(2)TF25-200mg/L各組生長曲線均低于TF0mg/L組，細(xì)胞增殖減緩，TF0-150mg/L各組細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH與細(xì)胞密度比值分別為6.19±0.41、5.92±0.93、10.16±0.42、5.44±0.28、4.14±0.64，差別無顯著性，而TF200mg/L組細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH與細(xì)胞數(shù)比值為58.13±8.96，高于其它各組，差別具有顯著性(F=131.176

6、p＜0.001)。(3)油紅O染色形態(tài)學(xué)顯示，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)顆粒隨TF濃度的增加而呈減少趨勢，細(xì)胞內(nèi)TCH含量(mg/g蛋白)由高到低順序排列分別為TF0mg/L(520.13±37.52)、TF25mg/L(375.39±39.78)、TF50mg/L(366.49±35.76)、TF150mg/L(263.55±27.72)、TF100mg/L(254.26±25.55)、TF200mg/L(249.23±22.69)mg/g蛋白，差別

7、具有顯著性(F=86.36p＜0.001)。TF0-25mg/L時細(xì)胞培養(yǎng)液中Ox-LDL濃度分別為21.13±2.30和19.38±4.50，高于TF50-200mg/L組(分別為12.88±4.09，12.38±1.30，8.50±2.07，14.29±5.33μg/d1)，差別有極顯著性(F=40.73p＜0.0001)。 研究結(jié)論：(1)新型U937巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型建立成功；(2)TF具有抑制U937細(xì)胞生長增殖