黃芩莖葉總黃酮抗高甘油三酯血清刺激的血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的： 1.研究人單純高甘油三酯(HTG)血清對大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)增殖的影響，并探討此病理狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)生物學(xué)變化。 2.探討血紅素氧合酶-1/-氧化碳(HO-1/CO)系統(tǒng)對單純高甘油三酯血清刺激的VSMCs增殖的保護(hù)作用及分子機(jī)制。 3.觀察黃芩莖葉總黃酮(SSTF)對單純高甘油三酯血清刺激的VSMCs增殖的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 傳代培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈VS

2、MCs，用人單純高甘油三酯血清誘導(dǎo)其增殖，觀察氯化血紅素(Hm，HO-1誘導(dǎo)劑)、鋅原卟啉-9(Znpp-IX，HO-1抑制劑)以及SSTF對單純HTG刺激的VSMCs增殖的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為正常血清組(C組)、高甘油三酯血清組(HTG組)、鋅原卟啉組(HTG+Znp組)、濃度梯度血紅素組(HTG+Hm組)、單純血紅素組(C+H3組)及濃度梯度藥物組(HTG+TF組)。采用四唑氮(MTT)比色法試驗(yàn)檢測VSMCs增殖

3、；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞增殖周期及增殖指數(shù)；采用透射電鏡技術(shù)觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化；運(yùn)用酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)上清液中碳氧血紅蛋白(COHb)的含量；通過Western blot檢測HO-1及ERK/p-ERK蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.MTT結(jié)果顯示，與C組相比，加入HTG吸光度值(A值)顯著增高(P<0.01)：與HTG組比較，HTG+Znp組A值顯著增高(P<0.01)，HTG+Hm組A值則顯著降低(P<0.01)，且呈

4、時(shí)間劑量依賴性。而單加入最大濃度Hm，與C組相比，C+H3組A值無明顯變化。SSTF顯著抑制HTG誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖(P<0.01)，呈時(shí)間劑量依賴性。 2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，加入HTG明顯刺激VSMCs細(xì)胞周期進(jìn)展。與C組比較，G0/G1期細(xì)胞百分率明顯減少，S期、G2/M期細(xì)胞百分率顯著增加，增殖指數(shù)也明顯升高(P<0.01，P<0.05)；加入HTG同時(shí)加入Znpp-IX，更顯著刺激細(xì)胞周期進(jìn)展(P<0.01)。相反，加入H

5、TG同時(shí)加入濃度梯度的Hm明顯抑制細(xì)胞周期進(jìn)展，與HTG組比較，G0/G1期VSMCs百分率明顯增多，S期、G2/M期VSMCs百分率顯著減少，增殖指數(shù)也明顯降低(P<0.05，P<0.01)，呈劑量依賴趨勢。單加入最大濃度Hm，細(xì)胞周期變化與C組相似(P>0.05)；加入SSTF明顯抑制VSMCs細(xì)胞周期進(jìn)展(P<0.01)，但HTG+TF組對細(xì)胞周期的阻滯作用不及HTG+H3組(P<0.05，P<0.01)。 3.透射電鏡技

6、術(shù)觀察到正常血清組VSMCs細(xì)胞核較大，呈橢圓、分葉或不規(guī)則形，細(xì)胞器豐富，胞內(nèi)含大量成網(wǎng)狀的微管。HTG組細(xì)胞核核膜不同程度凹陷，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體及線粒體明顯增多，有些粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈不同程度的囊性擴(kuò)張，胞漿內(nèi)可見有許多大小不一的脂滴，胞膜下有吞飲小泡，肌絲成份較少。 4.與Control組相比較，僅加入HTG時(shí)COHb含量無顯著性變化(P>0.05)，單加入Hm時(shí)COHb含量卻顯著增加(P<0.01)；與Control組及HT

7、G組比較，加入濃度梯度的Hm后COHb含量明顯增加，且呈時(shí)間劑量依賴關(guān)系(P<0.01)，而Znpp-IX則顯著降低COHb含量(P<0.01)。加入SSTF能明顯提高VSMCs COHb的生成(P<0.01)，但HTG+TF組細(xì)胞COHb的產(chǎn)量不及HTG+H3組(P<0.01)。 5.Western blot結(jié)果顯示，Control組、HTG組及HTG+TF組可見少量HO-1蛋白的表達(dá)，兩組間比較無顯著差異(P>0.05)，H

8、TG+ZnP組完全抑制HO-1蛋白的表達(dá)；與Control組及HTG組相比，Hm組HO-1蛋白表達(dá)顯著增高，呈劑量依賴趨勢(P<0.01)。另外，HTG組較Control組ERK/p-ERK蛋白的表達(dá)明顯增高(P<0.01)。與HTG組比較，HTG+ZnP組ERK/p-ERK蛋白的表達(dá)明顯增高(P<0.01)：相反，Hm組ERK/p-ERK蛋白表達(dá)則明顯減少，呈劑量依賴趨勢(P<0.01)；HTG+TF組ERK/p-ERK蛋白表達(dá)也明顯