線粒體乙醛脫氫酶2在糖尿病心肌病中的保護(hù)作用及可能機(jī)制探討.pdf

1、目的：研究線粒體乙醛脫氫酶2（ALDH2）在糖尿病大鼠離體心肌損傷中的作用，進(jìn)一步探討ALDH2的心肌保護(hù)作用是否與減少體內(nèi)氧化應(yīng)激及心肌纖維化、抑制凋亡發(fā)生及增加線粒體融合蛋白2（Mfn2）表達(dá)有關(guān)。
　　方法：腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型，DM組大鼠空腹12h后腹腔注射STZ55mg/kg，隨機(jī)分為DM4w組，8w組，12w組，每組8只。另取DM大鼠8只，于造模成功后的第2周將飲水換成2.5℅的乙醇，第3周后

2、換成5℅的乙醇，持續(xù)給藥至8周為EtOH+DM8w組。造模成功后分別于4w、8w、12w行離體心臟灌流，測定心室動力學(xué)指標(biāo)和心肌組織超氧化物岐化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和羥脯氨酸（Hp）含量變化；光鏡和電鏡觀察心肌組織結(jié)構(gòu)的變化；RT-PCR、Real-Time PCR測定左心室前壁心尖組織線粒體ALDH2和Mfn2 mRNA的表達(dá)， Western blot檢測ALDH2蛋白表達(dá)，免疫組化檢測Mfn2蛋白表達(dá)；分光光度法測定

3、心肌 Caspase-3和 Caspase-9活性。
　　結(jié)果：⑴左室心功能指標(biāo)：與同時間段Control組相比，DM4w組左室發(fā)展壓（left ventricular developed pressure, LVDP）、左室內(nèi)壓最大上升/下降速率（maximal rise/fall rate of left ventricular pressure,± dp/dtmax）無明顯變化；DM8w、DM12w組LVDP、±dp/dtm

4、ax均降低。與DM8w組相比，EtOH+DM8w組LVDP和±dp/dtmax均抬高。⑵抗氧化應(yīng)激：與同時間段Control組相比，DM4w組心肌SOD活性降低，MDA含量增高；DM8w、DM12w組心肌SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增高；且隨著病程的延長，SOD活性降低明顯，MDA含量增高顯著。與DM8w組相比，EtOH+DM8w組心肌SOD活性升高，MDA含量降低。⑶心肌膠原：與同時間段Control組相比，DM4w組心肌羥脯氨

5、酸含量增高；DM8w、DM12w組羥脯氨酸含量明顯增高；且隨著病程的延長，羥脯氨酸的含量顯著增高。與DM8w組相比，EtOH+DM8w組心肌組織中羥脯氨酸含量降低。⑷鏡下指標(biāo)：光鏡和電鏡結(jié)果顯示，與同時間段Control組相比，DM4w組心肌結(jié)構(gòu)無明顯改變；DM8w組心肌纖維排列紊亂，心肌間隙增寬，部分線粒體基質(zhì)及嵴腫脹；DM12w組心肌纖維斷裂、溶解，線粒體腫脹變性、嵴消失。與DM8w組相比，EtOH+DM8w組心肌病變減輕。⑸基因表

6、達(dá)：RT-PCR和Real-Time PCR結(jié)果顯示，與同時間段Control組相比，DM4w、DM8w、DM12w組心肌ALDH2和Mfn2 mRNA表達(dá)均降低；且隨著病程的延長，ALDH2和Mfn2 mRNA表達(dá)進(jìn)一步降低。與DM8w組相比，EtOH+DM8w組心肌ALDH2和Mfn2 mRNA表達(dá)升高。⑹蛋白表達(dá)：免疫組化結(jié)果：與Control組相比，DM4w、DM8w、DM12w組心肌Mfn2蛋白表達(dá)降低；與DM8w組相比，Et

7、OH+DM8w組心肌Mfn2蛋白表達(dá)上升。Western blot結(jié)果：與同時間段Control組比較，DM8w組心肌ALDH2蛋白表達(dá)降低；與DM8w組相比，EtOH+DM8w組心肌ALDH2蛋白表達(dá)上升。⑺凋亡指標(biāo)：與DM8w相比，EtOH+DM8w組Caspase-3，Caspase-9的含量降低。
　　結(jié)論：ALDH2在糖尿病大鼠心肌組織中呈低表達(dá)，且隨病程進(jìn)展， ALDH2的表達(dá)逐漸降低，心肌氧化應(yīng)激損傷和纖維化加重，促