DNA甲基化影響乙醛脫氫酶2(ALDH2)心肌缺血保護(hù)作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 MassARRAY定量分析法與普通亞硫酸鹽測(cè)序法檢測(cè)乙醛脫氫酶2低甲基化基因序列效果的對(duì)比研究
　　目的:
　　通過比較MassARRAY定量分析法與普通亞硫酸鹽測(cè)序法(BSP)在大鼠ALDH2基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)效果，為確定適用于低甲基化基因序列檢測(cè)的最佳方式提供依據(jù)。
　　方法:
　　取10只體重為（200±10）g之間的雄性SD大鼠，分2組，每組5只，分

2、為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組行心臟冠脈左前降支結(jié)扎術(shù)，制備心肌梗死模型。常規(guī)飼養(yǎng)7天后同時(shí)取材，實(shí)驗(yàn)組取材部位為梗死邊緣區(qū)心肌組織，對(duì)照組取材位置與實(shí)驗(yàn)組相同。提取邊緣區(qū)心肌組織DNA。分別使用MassARRAY定量分析法與普通BSP法檢測(cè)兩組ALDH2基因核心啟動(dòng)子上游同一段DNA序列甲基化情況。
　　結(jié)果:
　　BSP法可檢測(cè)顯示目標(biāo)區(qū)域12個(gè)CpG位點(diǎn)，檢測(cè)結(jié)果示對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組皆無DNA甲基化發(fā)生;MassARRAY定量分

3、析法可檢測(cè)目標(biāo)區(qū)域10個(gè)CpG位點(diǎn)，結(jié)果提示該DNA序列在對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組均有有輕度DNA甲基化，且實(shí)驗(yàn)組5號(hào)、6號(hào)及7號(hào)CpG位點(diǎn)的甲基化水平與對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　對(duì)于低甲基化基因序列，MassARRAY定量分析法擁有更好的DNA甲基化檢測(cè)精度，在定量分析DNA甲基化方面優(yōu)于BSP法。ALDH2基因啟動(dòng)子相關(guān)序列中的部分特殊序列需采用MassARRAY檢測(cè)方式。
　　第二部分 檢測(cè)缺

4、血大鼠心肌細(xì)胞乙醛脫氫酶2啟動(dòng)子甲基化水平變化的基礎(chǔ)研究
　　目的:
　　探索缺血缺氧條件下，心肌乙醛脫氫酶2(ALDH2)啟動(dòng)子甲基化水平的變化，并從DNA甲基化這一角度解釋缺血心肌ALDH2水平降低。
　　方法:
　　取40只體重為（200±10）g之間的雄性SD大鼠，分4組，每組10只，其中三組為心肌梗死模型組，造模方法為心臟冠脈左主干結(jié)扎術(shù)，剩余一組為空白對(duì)照組。心肌梗死模型三組根據(jù)術(shù)后取材時(shí)間分為心梗一

5、周組、心梗二周組及心梗三周組。取材部位為心肌梗死邊緣心肌組織，對(duì)照組仿心梗組位置取材。分別檢測(cè)取材心肌的ALDH2蛋白表達(dá)、DNA甲基化相關(guān)調(diào)節(jié)酶、mRNA表達(dá)、心肌DNA甲基化總體水平及ALDH2啟動(dòng)子相關(guān)序列甲基化水平。另取10只雄性SD大鼠，注射地西他濱(DAC)干預(yù)體內(nèi)DNA甲基化，每天以1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)給藥，一周后取材及檢測(cè)方法同前。
　　結(jié)果:
　　與正常心肌組織相比，缺血邊緣區(qū)心肌ALDH2蛋白表達(dá)降低，mRN

6、A表達(dá)降低(P＜0.05)，但心肌DNA甲基化總體水平無顯著差異。與正常心肌組織相比，缺血邊緣區(qū)心肌ALDH2啟動(dòng)子核心區(qū)域甲基化水平無差異，兩者均屬于未甲基化區(qū)域，該結(jié)果為BSP檢測(cè)所得。MassARRAY檢測(cè)顯示，缺血心肌ALDH2啟動(dòng)子上游494bp序列存在多個(gè)甲基化異常位點(diǎn)（CpG1，CpG2及CpG7），其甲基化水平顯著高于正常心肌組織(P＜0.05)。給予DAC干預(yù)后該區(qū)域甲基化異常位點(diǎn)DNA甲基化水平降低，ALDH2蛋白表