血管活性腸肽在下頜骨骨折愈合中的作用研究.pdf

1、目的：骨折愈合即骨折斷端的組織修復(fù)反應(yīng)，包括組織修復(fù)與纖維組織轉(zhuǎn)化為骨組織等過程，是在一系列細(xì)胞因子參與調(diào)控下的復(fù)雜過程。神經(jīng)系統(tǒng)在骨折愈合中起重要的調(diào)節(jié)作用，神經(jīng)肽在骨折創(chuàng)傷時，由感覺神經(jīng)釋放，參與組織細(xì)胞增殖、分化的調(diào)控，血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)是由28個氨基酸組成的神經(jīng)肽，是一種重要的神經(jīng)內(nèi)分泌分子，在周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)有廣泛的分布，作為一種重要神經(jīng)肽參與軟組織創(chuàng)傷和骨折的

2、修復(fù)重建。但其影響骨折愈合的機制及與其它調(diào)節(jié)因子間的相互作用仍不是十分清楚。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growthfactors，VEGF)是血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的絲裂原，能促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，從而增強血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，促進新生血管形成，是已被大量實驗證明的能夠促進骨折愈合的重要生長因子之一。有相關(guān)文獻(xiàn)報道稱，VIP可使肺癌、前列腺癌等腫瘤細(xì)胞合成VEGF，VEGF通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的特

3、異性受體結(jié)合，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，進而促進腫瘤組織新生血管的形成。本課題通過建立失下牙槽神經(jīng)(inferior alveolar nerve，IAN)下頜骨骨折的動物模型，了解新生骨痂中VIP表達(dá)和微血管密度(microvessel density,MVD)的變化規(guī)律，探討在骨折愈合中VIP與骨折斷端新生血管形成、骨痂質(zhì)量以及骨折愈合速度和方式的關(guān)系；通過體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein vess

4、el Endothelial Cells，HUVECs)，在培養(yǎng)液中加入外源性VIP，觀察HUVECs增殖以及VEGF合成的影響，初步探討VIP在頜骨骨折愈合中的作用及可能機制。 方法： 1．動物實驗： 本試驗改良以往失神經(jīng)及下頜骨骨折模型，每只試驗兔做雙側(cè)下頜骨骨折：右側(cè)單純下頜骨骨折(35只)；左側(cè)IAN橫斷+左側(cè)下頜骨骨折(35只)，分別于術(shù)后第7、14、21、28、35天各處死7只，制備骨折部位骨痂組織標(biāo)

5、本，運用組織學(xué)和免疫組織化學(xué)方法并結(jié)合計算機圖像分析系統(tǒng)對兩側(cè)骨痂組織愈合質(zhì)量、愈合方式和速度以及骨痂中VIP的表達(dá)和MVD的變化規(guī)律進行檢測和分析。 2．細(xì)胞試驗： 為驗證VIP是否具有促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用及其作用機制，我們采用HUVECs細(xì)胞系進行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中加入外源性VIP，應(yīng)用MTlT法檢測HUVECs的增殖情況，并利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)檢測促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的重要生長因子VEGF的

6、合成。 結(jié)果： 動物實驗結(jié)果：(1)失IAN骨折側(cè)骨痂組織中骨小梁排列稀疏而且不規(guī)則，類骨質(zhì)及骨吸收空腔較多；單純骨折側(cè)骨痂組織中新生骨小梁粗大致密、排列規(guī)則，且生長速度較快。(2)單純骨折側(cè)骨折后7天骨痂中即可見到VIP陽性神經(jīng)纖維，14、21、28天在編織骨邊緣有大量的VIP陽性神經(jīng)纖維，35天減少；而失IAN骨折側(cè)骨折后7天骨痂中見VIP陽性表達(dá)外，以后各時間點骨痂僅有極低水平的VIP表達(dá)。(3)單純骨折側(cè)骨折后7

7、天八因子相關(guān)抗原(factorⅧrelated antigen，fⅧag)呈弱陽性表達(dá)，14、21、28天表達(dá)明顯增強,35天略減弱，而失IAN骨折側(cè)各時相點表達(dá)均較單純骨折側(cè)弱。 細(xì)胞試驗結(jié)果：(1)VIP能顯著刺激HUVECs的增殖。(2)VIP對VEGF在HUVECs中的合成具有正調(diào)節(jié)作用。 結(jié)論： (1)IAN參與調(diào)控下頜骨骨折的愈合，VIP是參與骨折愈合調(diào)控的重要神經(jīng)肽之一。 (2)骨折部位VIP濃度對

8、骨痂質(zhì)量有直接影響，失神經(jīng)支配使骨折部位VIP表達(dá)顯著減少，使骨痂成熟度降低，同時骨折愈合速度減慢。(3)在骨折愈合的不同階段VIP的表達(dá)強弱不同，這種差異對骨折愈合的調(diào)控有重要意義，并且VIP表達(dá)強弱與MVD大小變化呈正相關(guān)，說明VIP可能促進骨折斷端新生血管的形成。 (4)VIP具有促進HUVECs增殖的作用，并且這種作用可能是通過上調(diào)VEGF在HUVECs的表達(dá)來實現(xiàn)。 (5)促進骨折斷端新生血管的形成是VIP參與骨折愈合調(diào)控的機