血管活性腸肽在氣道上皮損傷修復(fù)中的作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、血管活性腸肽(VIP)是肺內(nèi)重要的感覺神經(jīng)肽，主要由非腎上腺素能非膽堿能神經(jīng)纖維釋放。VIP陽性神經(jīng)纖維廣泛分布于氣道上皮細(xì)胞、支氣管平滑肌層、肺血管和支氣管血管的管壁以及粘膜下的腺體周圍。VIP的受體則主要分布于肺血管平滑肌、氣道平滑肌、氣道上皮層、粘膜下的腺體、巨噬細(xì)胞、肺泡上皮和淋巴細(xì)胞等。VIP除擴(kuò)張血管外，還具有舒張氣道平滑肌、減少肺炎性介質(zhì)釋放、清除氧自由基和抗細(xì)胞凋亡等生物學(xué)作用，其在機(jī)體內(nèi)的多種效應(yīng)日益受到重視。

2、 支氣管上皮細(xì)胞是炎癥和物理刺激因子的靶細(xì)胞，在哮喘、支氣管炎等氣道高反應(yīng)性疾病中，常伴有不同程度氣道上皮結(jié)構(gòu)破壞和功能受損。氣道上皮的修復(fù)包括損傷邊緣細(xì)胞變平、鋪展、向損傷部位遷移和基細(xì)胞增殖分化成纖毛上皮細(xì)胞以及功能的恢復(fù)等環(huán)節(jié)。作為肺內(nèi)重要的神經(jīng)肽，VIP對(duì)氣道上皮損傷后的結(jié)構(gòu)及功能的恢復(fù)有何影響尚未見報(bào)道。因此，探討VIP在氣道上皮損傷修復(fù)中的作用及其分子機(jī)制，有助于揭示VIP在維持氣道穩(wěn)態(tài)中的作用，尋找促進(jìn)肺損傷修復(fù)的可能途徑

3、，具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和臨床應(yīng)用前景。 目的：研究血管活性腸肽(VIP)對(duì)氣道上皮損傷后修復(fù)過程的影響，并探討其可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 方法：(1)VIP對(duì)人氣道上皮損傷修復(fù)過程的影響：以人支氣管上皮細(xì)胞(HBECs)株為研究對(duì)象，觀察VIP對(duì)HBECs損傷修復(fù)指數(shù)的影響；采用blind-well Boydenchamber法測定VIP對(duì)HBECs趨化性的影響；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測ftBECs增殖相關(guān)抗原Ki67的表達(dá)；

4、流式細(xì)胞儀檢測VIP對(duì)HBECsS期細(xì)胞百分率(SPF)和細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)的影響；采用免疫細(xì)胞化學(xué)、RT-PCR法檢測人支氣管上皮細(xì)胞鈣粘素(E-cd)蛋白及其mRNA的表達(dá)。(2)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究：以HBECs為研究對(duì)象，觀察PKC抑制劑H-7、CaM抑制劑W-7、PKA抑制劑H-89和ERK抑制劑PD98059對(duì)VIP促損傷修復(fù)作用的影響。(3)CREB在VIP促氣道損傷修復(fù)中的作用研究:以hbecs為研究對(duì)象,采用凝膠遷移滯

5、后實(shí)驗(yàn)(emsa)檢測camp反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(creb)的活性;采用wsternblot檢測creb的表達(dá)及磷酸化水平,并采用反義寡核苷酸阻斷creb的表達(dá),觀察其在vip促hbecs損傷修復(fù)過程中的調(diào)節(jié)作用。 結(jié)論： 1．VIP可加快HBECs的損傷修復(fù)過程、增強(qiáng)HBEBECs的趨化遷移能力并表現(xiàn)出促增殖效應(yīng)。 2．VIP可上調(diào)HBECs E-cd蛋白及mRNA的表達(dá)，有利于支氣管上皮結(jié)構(gòu)與功能的恢復(fù)。