三七凝膠對家兔椎板切除術后硬膜外瘢痕中膠原代謝和瘢痕攣縮的影響.pdf

1、研究背景
　　 脊柱椎板減壓術后硬膜外瘢痕是導致繼發(fā)性椎管狹窄的重要因為之一,因此,預防硬膜外瘢痕粘連,防止繼發(fā)性椎管狹窄,對手術預后癥狀的改善,功能的恢復具有重要意義。中藥通過活血化瘀、益氣止血減少瘢痕形成的研究多有報道,我們前期動物實驗研究證實三七凝膠能夠有效預防椎板減壓術后硬膜外瘢痕粘連的形成。中藥三七具有止血活血及抗纖維化作用,透明質酸鈉為生物體內普遍存在的酸性粘多糖,具有良好的生物相容性,并具有一定的預防術后瘢痕粘連的

2、作用。本研究采用中藥三七配合載體透明質酸鈉作為凝膠基質,制成三七透明質酸鈉凝膠(以下簡稱三七凝膠),作為新的手術中植入材料,在膠原代謝和瘢痕攣縮等方面進行預防瘢痕粘連的機理探索。
　　 研究目的
　　 1觀察三七凝膠對家兔硬膜外瘢痕組織的病理形態(tài)學改變及Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維的生長情況的影響。
　　 2研究三七凝膠對家兔硬膜外瘢痕組織中Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、TIMP-1、MMP-1、α—SMA等相關細胞因子和膠原酶表達

3、的影響,探討三七凝膠在膠原代謝和瘢痕攣縮方面對硬膜外瘢痕的作用。
　　 研究方法
　　 1三七凝膠的配制
　　 取三七生藥加60％乙醇回流提取,醇提液回收乙醇,濃縮,加水返溶,取上清液,加入透明質酸鈉,靜置使完全溶脹,攪拌均勻,加注射用水調整體積,滅菌30分鐘,即得(每毫升凝膠含三七生藥0.5g)。
　　 2實驗方法
　　 大耳白品系家兔96只,體重2.0～2.5kg,6月齡,雌雄各半,按照完全隨

4、機方法分為生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組、三七凝膠組,制作家兔椎板切除模型,分別在硬膜囊周圍滴注生理鹽水、三七濃縮液、透明質酸鈉、三七凝膠各0.5ml,各組術后1、2、4、8周取材,HE染色觀察硬膜外瘢痕組織中的病理形態(tài)改變,苦味酸-天狼星紅染色觀察Ⅰ型、Ⅲ型膠原生長分布情況,原位雜交方法分析Ⅰ型膠原mRNA、Ⅲ型膠原mRNA、TIMP-1mRNA、MMP-1mRNA的表達,免疫組織化學方法分析α—SMA抗體的表達。
　　 結

5、果：
　　 1病理形態(tài)觀察
　　 1.1 HE染色
　　 ①一周:硬膜外見未完全吸收的血腫被炎性細胞包繞,胞外有少量的新生膠原纖維。生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組可見肉芽組織與硬膜囊結合較緊密,三七凝膠組硬膜外可見有潛在的腔隙,硬膜外血腫及炎性細胞較其它三組明顯減少(圖1-1～1-4)。
　　 ②二周:硬膜外血腫已吸收完全,被肉芽組織填充,胞外新生膠原纖維增多,三七凝膠組硬膜外粘連不明顯,生理鹽水組廣泛

6、粘連,較三七組、透明質酸鈉組更加明顯(圖1-5～1-8)。
　　 ③四周:肉芽組織纖維化明顯,膠原纖維趨于成熟,三七凝膠組瘢痕與硬膜囊無明顯粘連,其間有空隙存在,生理鹽水組粘連進一步加重,三七組、透明質酸鈉組較生理鹽水組粘連有所減輕(圖1-9～1-12)。
　　 ④八周:瘢痕組織出現攣縮,部分組織骨化閉合椎板缺損處,三七凝膠組硬膜外間隙明顯,生理鹽水組粘連致密,三七組、透明質酸鈉組粘連程度介于前兩者之間(圖1-13～1-

7、16)。
　　 1-2苦味酸-天狼星紅染色
　　 苦味酸-天狼星紅染色切片在普通顯微鏡下膠原纖維呈粉紅色,在偏振光顯微鏡下,Ⅰ型膠原呈粗大的紅色或黃色纖維,Ⅲ型膠原呈細的網狀或點狀綠色纖維,多分布于Ⅰ型膠原周圍。
　　 ①一周:造模區(qū)的膠原纖維較少,可見疏松的條束狀Ⅰ型膠原,Ⅲ型膠原呈點狀細纖維,散布于Ⅰ型膠原周圍。各組膠原纖維較稀少,排列無明顯規(guī)律性(圖2-1～2—4)。
　　 ②二周:造模區(qū)的膠原纖維

8、較一周時明顯增多,可見較為致密的條束狀Ⅰ型膠原,點狀Ⅲ型膠原散布于Ⅰ型膠原周圍。生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組中Ⅰ型膠原明顯增多,縱橫交錯,排列較為紊亂,Ⅲ型膠原相對較少。三七凝膠組中Ⅰ型膠原順序排列,Ⅲ型膠原排布較其它三組密集(圖2—5～2—8)。
　　 ③四周:造模區(qū)膠原纖維較二周時明顯增多增粗,分布更加密集,Ⅰ型膠原明顯增粗,Ⅲ型膠原呈網狀散布于Ⅰ型膠原周圍。生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組中Ⅰ型膠原縱橫交錯,排列紊亂,

9、三七凝膠組中Ⅰ型膠原順序排列,趨于規(guī)則,較其它三組稀疏,Ⅲ型膠原排布較其它三組密集(圖2-9～2—12)。
　　 ④八周:造模區(qū)膠原纖維較四周時有所減少,Ⅰ型膠原呈束帶狀分布,Ⅲ型膠原呈網狀分布于Ⅰ型膠原四周。生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組中Ⅰ型膠原縱橫交錯,排列紊亂,三七凝膠組中Ⅰ型膠原順序排列,規(guī)則,較其它三組稀疏,Ⅲ型膠原排布較其它三組密集(圖2-13～2—16)。
　　 2膠原纖維面密度
　　 Ⅰ型膠原

10、面密度三七凝膠組在用藥4周、8周時明顯低于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01)。三七組、透明質酸鈉組在用藥1周、2周、4周時明顯低于生理鹽水組(P<0.01或P<0.05)；Ⅲ型膠原面密度三七凝膠組在用藥4周、8周時明顯高于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01)。三七組、透明質酸鈉組在用藥1周、2周、4周時明顯高于生理鹽水組(P<0.01或P<0.05)。(表1；表2)
　　 3相關細胞因子、膠原酶的表達<

11、br>　　 3.1Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達
　　 Ⅰ型膠原mRNA表達三七凝膠組在用藥4周時明顯低于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01),三七組、透明質酸鈉組在用藥1周、2周時明顯低于生理鹽水組(P<0.01或P<0.05)；Ⅲ型膠原mRNA表達三七凝膠組在用藥4周時明顯高于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01)。(表3；表4)
　　 3.2 TIMP-1 mRNA、MMP—1 mRNA的表達<

12、br>　　 TIMP-1 mRNA表達用藥2、4周時三七凝膠組明顯低于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01或P<0.05),三七組、透明質酸鈉組明顯低于生理鹽水組(P<0.01或P<0.05)；MMP-1 mRNA表達三七凝膠組在用藥2、4周時明顯高于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01或P<0.05),三七組、透明質酸鈉組在用藥2周時明顯高于生理鹽水組(P<0.05)。(表5；表6)
　　 3.3α—SM

13、A抗體的表達
　　 α—SMA抗體表達在用藥1周、2周時,三七凝膠組、三七組、透明質酸鈉組明顯低于生理鹽水組(P<0.01或P<0.05),三七凝膠組與三七組、透明質酸鈉組差異不顯著(P>0.05)；用藥4周、8周時,三七凝膠組明顯低于生理鹽水組、三七組、透明質酸鈉組(P<0.01或P<0.05),三七組、透明質酸鈉組與生理鹽水組差異不顯著(P>0.05)。(表7)
　　 結論：
　　 1三七凝膠能夠減輕硬膜外瘢