水痘-帶狀皰疹病毒疫苗株在Vero細胞中傳代適應(yīng)及ELISA檢測血清IgG研究.pdf

1、水痘是由水痘.帶狀皰疹病毒(Varicella-Zoster Virus,VZV)引發(fā)的世界性傳染疾病.為了研制疫苗和有效診斷水痘,本文研究了VZV疫苗株在Vero細胞中傳代適應(yīng)、制備VZV抗原工藝和ELISA方法. 將VZV疫苗株在Veto細胞中連續(xù)傳代培養(yǎng),傳至第9代時,CPE明顯增多,病毒滴度從2～3log PFU/ml提高到≥4.2 log PFU/ml,能在超低溫條件下穩(wěn)定保存,表明毒株獲得了適應(yīng)性,可用于制備VZV抗

2、原.培養(yǎng)條件試驗表明,15L瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的適宜MOI(接種比例,logPFU/cell)為0.01,收獲時間在60～96h. 收獲病變細胞,經(jīng)超聲破碎、離心,制備了VZV全病毒ELISA(VAR ELISA)抗原.用Triton X-100裂解,通過Lentil Lectin Sephrose 4B親和層析純化,制備了VZV糖蛋白EIJSA(gpELISA)抗原,具有VZV特異性糖蛋白.兩種抗原的稀釋度達1:3000～1:4000

3、. 研究了VZV VAR ELISA和gpELISA的反應(yīng)條件,建立了相應(yīng)的方法學(xué). 兩種抗原最適使用稀釋度為1:4000,pH7.4的PBS緩沖液為包被液,10﹪新生牛血清為封閉液,抗原抗體反應(yīng)時間為120min,酶標(biāo)抗體工作濃度為1:120,辣根過氧化物酶作用底物為鄰苯二胺,酶標(biāo)抗體反應(yīng)時間為120min.Vcro gpELISA和VAR ELISA抗原加保護劑具有保存穩(wěn)定性和可重復(fù)性.Vcro gpELISA檢出W

4、HO VZV國際標(biāo)準(zhǔn)血清的抗體滴度較VAR ELISA提高了4倍,檢出下限分別為195mIU/ml和781mIU/ml,所得結(jié)果與國外成品試劑盒相符.應(yīng)用抗原,通過篩查,獲得了VZV陽性血清,測出的抗VZV IgG幾何平均滴度優(yōu)于人胚肺二倍體2BS細胞制備的VAR ELISA. VZV疫苗株在Vero細胞中能傳代適應(yīng)、制備毒種,用15L瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)可大量制備VZV抗原.建立了Vero細胞制備的VZV IgG VAR ELISA和g