TGF-β1、Smad3和CTGF在女性壓力性尿失禁患者陰道壁組織中的表達及意義.pdf

1、壓力性尿失禁(Stress Urinary Incontinence，SUI)被認為是尿道對控尿起“開關-閥門”失控引起的功能障礙性疾病，多數(shù)患者由于分娩、創(chuàng)傷等引起肛提肌損傷、盆底筋膜和韌帶松弛、泌尿道解剖位置改變所致。SUI是一種多因素參與的復雜性疾病，往往伴隨女性盆腔器官脫垂(pelvic organ prolapse，POP)。其特點是平時無漏尿，如咳嗽、大笑、重體力勞動等腹壓增加時，尿液不自主地自尿道流出，且癥狀嚴重程度隨年齡

2、的增長而加重，在美國60歲及以上38％婦女及17％男性均患有尿失禁。因此，國際控尿協(xié)會將SUI定義為腹壓突然增加時導致尿液失控不自主流出，其病因非逼尿肌收縮壓引起而是盆底解剖結構出現(xiàn)異?；蛉睋p致壓力傳導不均。有人將該病形象的稱為“社交癌”。雖然壓力性尿失禁不像心血管、腫瘤等疾病嚴重危及患者的生命健康，卻也引起了社會、經(jīng)濟和衛(wèi)生等不同程度的影響;其嚴重程度越來越受到廣大婦女的關注。隨著“吊床假說”和“盆底整體理論”的提出，人們逐漸意識到僅

3、單純檢測尿道壓、尿道長度及膀胱尿道角等解剖改變的傳統(tǒng)方法已經(jīng)無法全面合理解釋SUI的發(fā)病機制，這就促使研究人員從分子生物學水平深入研究盆底支持組織的解剖結構及功能。眾多研究表明，女性SUI患者盆底支持結構中膠原及彈性蛋白含量顯著減少，引起支持組織彈性減弱，出現(xiàn)盆底松弛。而轉化生長因子-β1(TGF-β1)作為最重要的細胞因子，既與膠原和彈性蛋白的合成及降解直接相關，又可改變基質降解酶及其抑制因子的量及活性，在分娩、手術等造成盆底支持組織

4、損傷修復過程中發(fā)揮關鍵性作用。結締組織生長因子(CTGF)可刺激成纖維細胞增殖和分泌膠原，在纖維化性疾病、創(chuàng)傷后瘢痕形成等方面有較多的研究，然而在盆底障礙性疾病的研究國內外少有報道。而Smad3蛋白是細胞內TGF-β信號轉導分子，對細胞功能起著雙向調控作用，參與控制創(chuàng)面組織的愈合。
　　目的：
　　本研究通過采用免疫組化和聚合酶-逆轉錄(RT-PCR)方法檢測TGF-β1、CTGF及Smad3三者在女性SUI患者陰道壁組織中

5、的表達，分析三者之間的相關性，探討他們在SUI發(fā)生機制中的作用，期望為該病的預防、治療提供理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.材料
　　選取2012年6月-2013年4月在本院婦產(chǎn)科收治的的60例中、重度壓力性尿失禁患者為實驗組，包括25例單純性SUI，35例SUI合并POP，手術方式為經(jīng)陰道無張力尿道中段懸吊術(trans-obturatorvaginaltape，TVT-O)、陰道前后壁修補術，陰道前壁懸吊術。同

6、期選取20例宮頸上皮內瘤變患者均不伴SUI為對照組，手術方式為腹式或陰式子宮切除術。3組在年齡、產(chǎn)次及體重指數(shù)等方面差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有較好的可比性。所有病例均無類風濕性關節(jié)炎、甲狀旁腺功能亢進、肺氣腫和肝纖維化等影響膠原代謝的疾病，術前3個月內未曾使用過性激素類藥物，未患功能性卵巢腫瘤，無泌尿生殖道感染，無既往盆底手術史。SUI診斷依據(jù)為患者的病史、婦科檢查、壓力試驗、指壓試驗、尿墊實驗及尿動力學檢查結果。SUI合并

7、POP診斷依據(jù)是除具有壓力性尿失禁的診斷標準外，婦科檢查均發(fā)現(xiàn)合并有POP-Q分類法Ⅱ度及以上的陰道前壁膨出。實驗組于陰道前壁12點或膀胱宮頸韌帶周圍取兩塊陰道前壁組織各約0.8cm×0.5cm×0.2cm大小。對照組取自子宮切除后陰道殘端陰道壁組織。
　　2.實驗方法
　　采用免疫組化(SP)法檢測SUI組、SUI+POP組和對照組患者陰道前壁組織中TGF-β1、CTGF和Smad3蛋白的表達情況。采用逆轉錄-聚合酶鏈式反

8、應(RT-PCR)技術檢測三組TGF-β1、CTGF和Smad3mRNA水平。
　　3.統(tǒng)計學分析
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)處理。多組定性資料的比較采用獨立的多組二分類，兩兩比較采用四格表卡方檢驗，檢驗水準取α/3=0.0167;多組定量資料的比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t法。兩連續(xù)變量相關分析采用Pearson積矩相關。檢驗水準α=0.05。
　　結果：
　　1.免疫組化染色結果<

9、br>　　SUI組、SUI+POP組和對照組3組患者陰道壁組織中均可見TGF-β1蛋白、CTGF蛋白和Smad3蛋白的表達。TGF-β1和CTGF蛋白主要表達于胞漿，呈現(xiàn)淡黃色至棕黃褐色的細胞為陽性細胞;Smad3蛋白主要表達于細胞核，呈現(xiàn)淡黃色至棕黃褐色顆粒的細胞為陽性細胞。
　　1)TGF-β1蛋白在3組陰道壁中陽性表達率分別為28％、17.14％、95％，3組之間差異有顯著性(x2=34.327，P＜0.01);SUI組和S

10、UI+POP組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。
　　2)CTGF蛋白在3組陰道壁中陽性表達率分別為16％、20％、95％，3組之間差異有顯著性(x2=37.717，P＜0.01);SUI組和SUI+POP組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3)Smad3蛋白在3組陰道壁中陽性表達率分別為24％、14.29％、90％，3組之間差異有顯著性(x2=33.933，P＜0.01);SUI組和SUI+POP組比較，差異無顯

11、著性(P＞0.05)。
　　2.RT-PCR結果
　　半定量測定結果顯示:TGF-β1mRNA、CTGFmRNA及Smad3mRNA在3組中均為陽性表達。
　　1)TGF-β1mRNA在SUI組、SUI+POP組和對照組陰道壁組織中表達量分別為（0.294±0.013）、（0.293+0.019）和（0.610±0.052），SUI組、SUI+POP組與對照組比較差異均有顯著性(P＜0.01);而SUI組與SUI+PO

12、P組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　2)CTGFmRNA在SUI組、SUI+POP組和對照組陰道壁組織中表達量分別為（0.085+0.012）、（0.092±0.011）和（0.272±0.029），SUI組、SUI+POP組與對照組比較差異均有顯著性(P＜0.01);而SUI組與SUI+POP組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3)Smad3mRNA在SUI組、SUI+POP組和對照組陰道壁組織中表達量分別為

13、（0.091±0.011）、（0.088±0.012）和（0.272±0.029），SUI組、SUI+POP組與對照組比較差異均有顯著性(P＜0.01);而SUI組與SUI+POP組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3.SUI患者組織中TGF-β1和CTGF的關聯(lián)性分析
　　相關分析顯示:SUI組陰道壁組織中TGF-β1與CTGF呈正相關(r=0.959，P＜0.05)，TGF-β1與Smad3的表達呈正相關(r=0.