骨髓干細胞動員劑治療急慢性肝損傷的實驗研究.pdf

1、目的：觀察重組人粒細胞集落刺激因子(hrG-CSF)對CCl4所致急、慢性肝損傷的保護及治療作用，探討hrG-CSF動員的骨髓干細胞在受損肝臟組織內(nèi)定植的能力，為臨床治療重型肝炎、肝硬化等終末期肝臟疾病提供新的手段。 方法：清潔級雄性BALB/C小鼠，體重21-24g，隨機分組。 1.亞急性肝損傷實驗，隨機分為預防組與造模組，各15只，分別應用hrG-CSF200ug/kg/d和等量生理鹽水皮下注射，在應用CCl4肝損傷

2、前先連續(xù)治療7天，以后每周一、五腹腔注射40％CCl4，4ml/kg(橄欖油稀釋)腹腔注射，每周二、三、四皮下注射治療藥物，共4周。 2.為觀察hrG-CSF對外周血細胞的影響，用小鼠21只，hrG-CSF200ug/kg/d皮下注射，連續(xù)6天，于0-6天每日采血檢測外周血CD34+細胞計數(shù)、血常規(guī)。 3.慢性肝損傷實驗，40％CCl42ml/kg每周2次腹腔注射，持續(xù)70天。預防組25只，在應用CCl4前先hrG-CS

3、F200ug/kg/d皮下注射連續(xù)7天，以后再每隔20天連續(xù)應用5天；模型組52只應用生理鹽水。 4.在治療性實驗中，上述慢性肝損傷實驗中制備的動物模型，隨機分為治療組和對照組，各18只，治療組給予hrG-CSF200ug/kg/d皮下注射連續(xù)7天，對照組應用等量生理鹽水，分另于肝硬化模型制備終止8天、15天、30天處死動物。 5.為證實外周血干細胞可以定居于受損傷的肝臟，取雄性小鼠18只，用hrG-CSF200ug/k

4、g/d皮下注射，連續(xù)5天，取外周血分離單個核細胞，用于給雌性肝損傷小鼠間斷提供干細胞。雌性小鼠12只，40％CCl42ml/kg腹腔注射，每周2次，上述雄性小鼠單個核細胞尾靜脈注射，每周2次共3周，自最后一次移植30天后處死并行Y染色體原位雜交。 6.血常規(guī)、肝功能、肝纖維化指標及超氧化物歧化酶、丙二醛含量采用臨床常規(guī)方法。病理檢測用10％福爾馬林固定臟器，常規(guī)應用HE染色及苦味酸-天狼猩紅染色，顯微鏡觀察。Y染色體原位雜交、T

5、hy-1免疫組化及CD34流式細胞分析均按有關試劑盒說明或常規(guī)方法進行。 結論： 1.hrG-CSF能提高CCl4所致的急慢性肝損傷小鼠的生存率。 2.hrG-CSF能夠減輕CCl4所所致小鼠慢性肝損傷，保護肝功能，促進CCl4所致肝硬化的恢復。 3.Thy-1的免疫組化及CD34細胞流式細胞分析，提示骨髓干細胞及肝內(nèi)干細胞都可能參與嚴重肝損傷的修復。 4.Y染色體原位雜交結果證實，外周血干細胞能