骨髓干細(xì)胞動(dòng)員劑治療急慢性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(hrG-CSF)對(duì)CCl4所致急、慢性肝損傷的保護(hù)及治療作用，探討hrG-CSF動(dòng)員的骨髓干細(xì)胞在受損肝臟組織內(nèi)定植的能力，為臨床治療重型肝炎、肝硬化等終末期肝臟疾病提供新的手段。 方法：清潔級(jí)雄性BALB/C小鼠，體重21-24g，隨機(jī)分組。 1.亞急性肝損傷實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為預(yù)防組與造模組，各15只，分別應(yīng)用hrG-CSF200ug/kg/d和等量生理鹽水皮下注射，在應(yīng)用CCl4肝損傷

2、前先連續(xù)治療7天，以后每周一、五腹腔注射40％CCl4，4ml/kg(橄欖油稀釋)腹腔注射，每周二、三、四皮下注射治療藥物，共4周。 2.為觀察hrG-CSF對(duì)外周血細(xì)胞的影響，用小鼠21只，hrG-CSF200ug/kg/d皮下注射，連續(xù)6天，于0-6天每日采血檢測(cè)外周血CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)、血常規(guī)。 3.慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)，40％CCl42ml/kg每周2次腹腔注射，持續(xù)70天。預(yù)防組25只，在應(yīng)用CCl4前先hrG-CS

3、F200ug/kg/d皮下注射連續(xù)7天，以后再每隔20天連續(xù)應(yīng)用5天；模型組52只應(yīng)用生理鹽水。 4.在治療性實(shí)驗(yàn)中，上述慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)中制備的動(dòng)物模型，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，各18只，治療組給予hrG-CSF200ug/kg/d皮下注射連續(xù)7天，對(duì)照組應(yīng)用等量生理鹽水，分另于肝硬化模型制備終止8天、15天、30天處死動(dòng)物。 5.為證實(shí)外周血干細(xì)胞可以定居于受損傷的肝臟，取雄性小鼠18只，用hrG-CSF200ug/k

4、g/d皮下注射，連續(xù)5天，取外周血分離單個(gè)核細(xì)胞，用于給雌性肝損傷小鼠間斷提供干細(xì)胞。雌性小鼠12只，40％CCl42ml/kg腹腔注射，每周2次，上述雄性小鼠單個(gè)核細(xì)胞尾靜脈注射，每周2次共3周，自最后一次移植30天后處死并行Y染色體原位雜交。 6.血常規(guī)、肝功能、肝纖維化指標(biāo)及超氧化物歧化酶、丙二醛含量采用臨床常規(guī)方法。病理檢測(cè)用10％福爾馬林固定臟器，常規(guī)應(yīng)用HE染色及苦味酸-天狼猩紅染色，顯微鏡觀察。Y染色體原位雜交、T

5、hy-1免疫組化及CD34流式細(xì)胞分析均按有關(guān)試劑盒說(shuō)明或常規(guī)方法進(jìn)行。 結(jié)論： 1.hrG-CSF能提高CCl4所致的急慢性肝損傷小鼠的生存率。 2.hrG-CSF能夠減輕CCl4所所致小鼠慢性肝損傷，保護(hù)肝功能，促進(jìn)CCl4所致肝硬化的恢復(fù)。 3.Thy-1的免疫組化及CD34細(xì)胞流式細(xì)胞分析，提示骨髓干細(xì)胞及肝內(nèi)干細(xì)胞都可能參與嚴(yán)重肝損傷的修復(fù)。 4.Y染色體原位雜交結(jié)果證實(shí)，外周血干細(xì)胞能