丹酚酸B與銀杏葉提取物EGb761的藥理作用比較及其相關(guān)的作用機(jī)制研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高和醫(yī)療條件的改善，世界上許多國(guó)家的人均壽命有所延長(zhǎng)，因而老齡人群的比例逐漸增大，隨之而來(lái)的就是神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病率逐年上升。神經(jīng)退行性疾病分為慢性和急性?xún)深?lèi)，由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，發(fā)病原因至今尚不清楚。阿爾茨海默病(AD)是一種最常見(jiàn)的慢性神經(jīng)退行性疾病，以漸進(jìn)性的記憶力和認(rèn)知功能障礙為主要特征；而腦缺血為急性神經(jīng)退行性疾病，常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺損。這兩種疾病的病理改變雖然不同，但存在某些共同的神經(jīng)損傷機(jī)制，

2、如氧化應(yīng)激、鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)、興奮性氨基酸毒性等。 本研究工作利用多種神經(jīng)損傷模型，對(duì)SaIB和EGb761的藥理作用進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)SaIB的神經(jīng)保護(hù)作用，并對(duì)SaIB可能的作用機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。 第一部分：SaIB與EGb761抗氧化活性的比較1、SaIB與EGb761對(duì)超氧陰離子(O2·-)清除作用的比較兩種體外反應(yīng)體系用來(lái)產(chǎn)生O2·-：黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系，是體外產(chǎn)生O2·-最常用的方法，而且它類(lèi)似于生物體內(nèi)產(chǎn)生

3、O2·-的過(guò)程；PMS/NADH體系是很重要的一種非酶體系產(chǎn)生O2·-的方法。 2、SaIB與EGb761對(duì)羥基自由基(·OH)清除作用的比較Fenton反應(yīng)體系用來(lái)產(chǎn)生·OH，采用兩種不同的方法對(duì)·OH進(jìn)行測(cè)定：高效液相電化學(xué)檢測(cè)器(HPLC-ECD)和分光光度法。 3、SaIB和EGb761對(duì)大鼠微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用的比較密度梯度離心法制備線(xiàn)粒體，維生素C-NADPH體系誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化，用TBA比色法測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧

4、化產(chǎn)物MDA的含量。IB對(duì)微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用強(qiáng)于EGb761。 4、SaIB和EGb761對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)損傷神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用比較以H2O2損傷SH-SY5Y細(xì)胞為氧化應(yīng)激損傷神經(jīng)元模型，觀(guān)察SaIB和EGb761對(duì)H2O2導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。 第二部分：SaIB與EGb761對(duì)體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用比較1、β-淀粉樣蛋白(Aβ)引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷及藥物的保護(hù)作用為了比較SaIB和EG

5、b761對(duì)Aβ纖維形成及細(xì)胞毒作用的影響，運(yùn)用ThT熒光法和電子顯微鏡技術(shù)分析了SaIB和EGb761對(duì)Aβ1-40聚集和纖維形成的影響；另將Aβ25-35預(yù)先老化7天，用MTT法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種提取物對(duì)此老化蛋白造成的PC12細(xì)胞毒性的保護(hù)作用，用DCF熒光法觀(guān)察Aβ25-35作用后細(xì)胞內(nèi)活性氧含量的變化以及兩種提取物的作用。 2、崗田酸(OA)引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷及藥物的保護(hù)作用本實(shí)驗(yàn)以O(shè)A損傷SH-SY5Y細(xì)胞作為類(lèi)似A

6、D的細(xì)胞模型，觀(guān)察SaIB和EGb761對(duì)OA造成神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響。 3、去血清誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及藥物的保護(hù)作用以去血清誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡作為一種氧化應(yīng)激的體外模型，觀(guān)察SaIB和EGb761這兩種抗氧化劑是否對(duì)去血清造成的神經(jīng)細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。 4、鈣離子載體誘發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡用鈣離子載體lonomycin引起SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)鈣超載而誘導(dǎo)凋亡，觀(guān)察SaIB和EGb761這兩種抗氧化劑是否對(duì)這種損傷具

7、有保護(hù)作用。 第三部分：SaIB與EGb761對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用比較采用栓線(xiàn)法制備大腦中動(dòng)脈阻斷(MCAO)模型，2小時(shí)后將尼龍線(xiàn)拔出而再灌，縫合傷口，再灌注24小時(shí)。藥物治療組再灌注同時(shí)靜脈注射7.5和15mg/kgSaIB或者50和100mg/kgEGb761。 第四部分：SaIB神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究Aβ和腦缺血都能導(dǎo)致p35→p25裂解增加，而p25的含量增加可以持續(xù)激活CDK5，從而使細(xì)胞骨架破壞

8、，細(xì)胞死亡。鈣激活蛋白酶(Calpain)是p35→p25裂解的關(guān)鍵蛋白酶。本實(shí)驗(yàn)用鈣離子指示劑Fura-2/AM檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，蛋白印跡法分析了p35和p25蛋白的表達(dá)變化。 從以上SaIB和EGb761藥理作用的比較可以看出，SaIB在實(shí)驗(yàn)性AD和腦缺血模型中均顯示了良好的神經(jīng)保護(hù)作用，而抗氧化作用是其重要的作用機(jī)制。我們相信，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展和研究的深入，必將進(jìn)一步揭示SaIB的作用機(jī)理，擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，為防治