Matrilin-2與肝卵圓細胞增殖關系及維生素K2對其影響的實驗研究.pdf

1、通過建立大鼠肝卵圓細胞(hepatic oval cells，HOC)增殖模型，探討matrilin-2對HOC增殖分化調控作用及維生素K2(Vitamin K2，VK2)對其的影響。進一步闡明肝內細胞外基質(extracellular matrix，ECM)成分在維持肝臟正常結構和細胞的增殖、分化、遷移方面具有的重要作用。在利用藥物(如VK2)促進內源性成體肝干細胞增殖、分化，加速肝再生，防治肝功能損害或衰竭等方面提供了一定的理論和應

2、用依據。
　　 [方法]
　　 將健康SPF級雄性SD大鼠隨機分為五組：A.2-乙酰氨基芴組(2AAF組)、B.切肝組(HP組)、C.VK2+切肝組(VK2/HP組)、D.2AAF+切肝組(2AAF/HP組)、E.2AAF+VK2+切肝組(2AAF+VK2/HP組)，每組30只。各組分別給藥后按改良的Solt-Farber大鼠模型構建方法將肝臟切除三分之二。于切肝術后第4、8、12、16、20天，共5個時間點手術取得大鼠

3、肝臟，每組每個時間點5只，分別用甲醛固定及液氮保存，用于制作病理切片、免疫組織化學染色，以觀察HOC增殖情況，用熒光定量PCR方法檢測各組肝組織中matrilin-2 mRNA的表達，并進行統(tǒng)計學分析。
　　 [結果]
　　 1.造模后大鼠一般情況：2AAF/HP組：術后活動減少、精神差，隨后出現毛松無光澤、尿黃、腹水，4只大鼠死亡，死亡率13.3％，而2AAF+VK2/HP組無明顯被毛松亂、尿黃，無腹水，2只大鼠死亡，

4、死亡率6.7％。其它各組無特殊。
　　 2.形態(tài)學與組織學變化：2AAF/HP組：肝臟代償性增大、充血、肝緣圓鈍，表面及切面可見散在圓形點狀病灶、不凸出肝表面，部分見出血點。鏡下肝細胞水腫、肝索結構紊亂，匯管增生反應，HOC呈簇狀分布，隨時間推移從匯管區(qū)向小葉中央遷移，術后20天結構基本恢復。2AAF+VK2/HP組：未見出血點及點狀病灶，無腹水，匯管區(qū)增生更明顯，分化、遷移加快，12天后已基本恢復正常。兩組相同時間點OV-6陽

5、性細胞計數2AAF+VK2/HP組較多，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，同組內第4、8天與12天、第16、20天與12天差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其余各組HOC增殖不明顯，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 3.熒光定量PCR檢測matrilin-2 mRNA表達情況：各組均有一定量的表達，但以2AAF/HP組及2AAF+VK2/HP組最為明顯，兩組術后第4天、第8天matrilin-2mRNA表達以2AAF+VK2

6、/HP組較多，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而從第12天起，兩組表達量相當，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，且高峰值相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。同組內第4、8天與12天、第16、20天與12天差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.將HOC計數與matrilin-2 mRNA表達量行線性相關分析：2AAF/HP組相關系數r=0.79，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；2AAF+VK2/HP組相關系數r=0.6

7、8，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 [結論]
　　 1.采用Solt-Farber方法成功建立了HOC增殖的2AAF/PH動物模型。
　　 2.Matrilin-2 mRNA的表達與HOC增殖分化呈正相關關系，表明matrilin-2對HOC具有調控作用。
　　 3.維生素K2可通過增強Matrilin-2 mRNA表達，促進HOC增殖，加速肝臟再生，對肝臟有一定保護作用。
　　 4.闡明肝