Matrilin-2與肝卵圓細胞增殖關系及維生素K2對其影響的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、通過建立大鼠肝卵圓細胞(hepatic oval cells,HOC)增殖模型,探討matrilin-2對HOC增殖分化調控作用及維生素K2(Vitamin K2,VK2)對其的影響。進一步闡明肝內細胞外基質(extracellular matrix,ECM)成分在維持肝臟正常結構和細胞的增殖、分化、遷移方面具有的重要作用。在利用藥物(如VK2)促進內源性成體肝干細胞增殖、分化,加速肝再生,防治肝功能損害或衰竭等方面提供了一定的理論和應

2、用依據。
   [方法]
   將健康SPF級雄性SD大鼠隨機分為五組:A.2-乙酰氨基芴組(2AAF組)、B.切肝組(HP組)、C.VK2+切肝組(VK2/HP組)、D.2AAF+切肝組(2AAF/HP組)、E.2AAF+VK2+切肝組(2AAF+VK2/HP組),每組30只。各組分別給藥后按改良的Solt-Farber大鼠模型構建方法將肝臟切除三分之二。于切肝術后第4、8、12、16、20天,共5個時間點手術取得大鼠

3、肝臟,每組每個時間點5只,分別用甲醛固定及液氮保存,用于制作病理切片、免疫組織化學染色,以觀察HOC增殖情況,用熒光定量PCR方法檢測各組肝組織中matrilin-2 mRNA的表達,并進行統(tǒng)計學分析。
   [結果]
   1.造模后大鼠一般情況:2AAF/HP組:術后活動減少、精神差,隨后出現毛松無光澤、尿黃、腹水,4只大鼠死亡,死亡率13.3%,而2AAF+VK2/HP組無明顯被毛松亂、尿黃,無腹水,2只大鼠死亡,

4、死亡率6.7%。其它各組無特殊。
   2.形態(tài)學與組織學變化:2AAF/HP組:肝臟代償性增大、充血、肝緣圓鈍,表面及切面可見散在圓形點狀病灶、不凸出肝表面,部分見出血點。鏡下肝細胞水腫、肝索結構紊亂,匯管增生反應,HOC呈簇狀分布,隨時間推移從匯管區(qū)向小葉中央遷移,術后20天結構基本恢復。2AAF+VK2/HP組:未見出血點及點狀病灶,無腹水,匯管區(qū)增生更明顯,分化、遷移加快,12天后已基本恢復正常。兩組相同時間點OV-6陽

5、性細胞計數2AAF+VK2/HP組較多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),同組內第4、8天與12天、第16、20天與12天差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其余各組HOC增殖不明顯,無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
   3.熒光定量PCR檢測matrilin-2 mRNA表達情況:各組均有一定量的表達,但以2AAF/HP組及2AAF+VK2/HP組最為明顯,兩組術后第4天、第8天matrilin-2mRNA表達以2AAF+VK2

6、/HP組較多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而從第12天起,兩組表達量相當,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且高峰值相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。同組內第4、8天與12天、第16、20天與12天差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
   4.將HOC計數與matrilin-2 mRNA表達量行線性相關分析:2AAF/HP組相關系數r=0.79,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2AAF+VK2/HP組相關系數r=0.6

7、8,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
   [結論]
   1.采用Solt-Farber方法成功建立了HOC增殖的2AAF/PH動物模型。
   2.Matrilin-2 mRNA的表達與HOC增殖分化呈正相關關系,表明matrilin-2對HOC具有調控作用。
   3.維生素K2可通過增強Matrilin-2 mRNA表達,促進HOC增殖,加速肝臟再生,對肝臟有一定保護作用。
   4.闡明肝

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