肝增殖模型中肝卵圓細(xì)胞增殖規(guī)律的初步研究.pdf

1、目的：
　　初步探討肝增殖模型中Hoc增殖的規(guī)律和肝臟組織中TGFβ、ALK-1、ALK-5表達(dá)的變化及其與Hoc增殖規(guī)律之間存在的聯(lián)系。
　　方法：
　　將F344大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分成假手術(shù)組（腹部正中切口不做任何處理，縫合腹腔）、肝切除組（PH組：肝2/3切除，術(shù)后灌胃50％食用酒精）、2-乙酰氨基芴組（2-AAF/PH組：肝2/3切除，術(shù)后灌胃2-乙酰氨基芴），然后再分別按照時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為3個(gè)亞組，共計(jì)9組,

2、分別為：假手術(shù)組7d、14d、21d(n=18)；肝切除組7d、14d、21d（n=18）；2-乙酰氨基芴組7d、14d、21d(n=18)。各組按照設(shè)置的時(shí)間點(diǎn)取肝臟組織。
　　蘇木素-伊紅染色觀察肝臟組織細(xì)胞的病理學(xué)改變；應(yīng)用免疫組織化學(xué)法鑒定Hoc。RT-PCR、Western-blot分別檢測各組肝臟組織中7d、14d、21d時(shí)TGFβ、ALK-1、ALK-5的mRNA及蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　HE染

3、色：假手術(shù)組術(shù)后可見大鼠肝小葉清晰，排列整齊，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常；PH組術(shù)后可見肝細(xì)胞水腫，結(jié)構(gòu)也逐漸發(fā)生改變，少數(shù)的肝細(xì)胞呈現(xiàn)點(diǎn)狀壞死；2-AAF/PH組術(shù)后在肝匯管區(qū)周圍可見成簇或者散在分布的細(xì)胞，呈卵圓形，體積小，約為正常肝細(xì)胞的1/3，細(xì)胞核深染，胞質(zhì)較少。
　　免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)很難見到EPCAM和Thy-1陽性細(xì)胞(肝卵圓細(xì)胞)；PH組在術(shù)后7d可見少量的Hoc；術(shù)后14d可見陽性細(xì)胞向肝內(nèi)遷移，術(shù)后2

4、1d僅見很少量Hoc；2-AAF/PH組術(shù)后7d、14d可見與PH組相似結(jié)果，但Hoc明顯增多且術(shù)后21d依然可見多量的Hoc.RT-PCR、Western-blot檢測結(jié)果:TGFβmRNA和蛋白的表達(dá)水平，PH組和2-AAF/PH組高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），PH組高于2-AAF/PH組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），假手術(shù)組三時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），PH組和2-AAF/PH組三時(shí)間點(diǎn)

5、表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ALK-5mRNA和蛋白的表達(dá)水平, PH組和2-AAF/PH組高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,2-AAF/PH組高于PH組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），假手術(shù)組三時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），PH組和2-AAF/PH組三時(shí)間點(diǎn)表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。ALK-1mRNA和蛋白的表達(dá)水平，PH組和2-AAF/PH組高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義（P<0.05），PH組高于2-AAF/PH組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），假手術(shù)組三時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），PH組和2-AAF/PH組三時(shí)間點(diǎn)表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.利用肝2/3切除和術(shù)后灌胃抑制肝細(xì)胞增殖的2-乙酰氨基芴成功構(gòu)建了肝增殖微環(huán)境下的肝卵圓細(xì)胞增殖模型；肝卵圓細(xì)胞EPCAM和Thy-1表達(dá)陽性。
　　2.TGFβ及其受體的表達(dá)和Hoc增