重組腺相關(guān)病毒-人凝血因子IX基因在人造血干-祖細(xì)胞中表達(dá)的研究.pdf

1、基因治療在理論上能治愈遺傳性疾病.血友病B是一種凝血因子IX(hFIX)基因缺陷引起的單基因出血性疾病.hFIX的表達(dá)不需要精確地調(diào)控,少量提高即可改善患者的出血癥狀,已證實(shí)有許多細(xì)胞能分泌具有生物學(xué)活性的hFIX,因此許多學(xué)者選擇它作為基因治療的首選疾病,開(kāi)發(fā)了各種載體用于血友病B的基因治療.基因治療的關(guān)鍵在于載體.最為常用的是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(RV),盡管RV具有高效轉(zhuǎn)移、能整合的優(yōu)點(diǎn),但它不能感染非分裂細(xì)胞,且隨機(jī)整合有可能引起插入

2、突變,使人們對(duì)它的安全性心存顧慮.重組腺相關(guān)病毒(rAAV)具有安全性好、宿主范圍廣,轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較高,長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá),可轉(zhuǎn)導(dǎo)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞的特點(diǎn),成為基因治療的熱點(diǎn).中國(guó)病毒基因工程國(guó)家重點(diǎn)試驗(yàn)室制備和純化的高滴度rAAV-2/hFIX,已在骨骼肌細(xì)胞等多種細(xì)胞獲得較高表達(dá),成為該實(shí)驗(yàn)選用的載體.靶細(xì)胞的選擇對(duì)hFIX的表達(dá)極其重要.自從Koeberl第一次在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)rAAV可介導(dǎo)hFIX在肝臟中表達(dá),人們采用各種靶細(xì)胞如肝細(xì)胞

3、、成纖維細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞等進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)研究,但這些終末分化細(xì)胞存在著分泌量低,表達(dá)不穩(wěn)定,需要反復(fù)治療及有創(chuàng)性治療對(duì)血友病患者不利等缺點(diǎn).造血干/祖細(xì)胞(HSPC)具有自我復(fù)制、定向分化和強(qiáng)大的擴(kuò)增潛能,分泌的hFIX直接入血,而且體外培養(yǎng)與移植技術(shù)成熟,是基因治療理想的靶細(xì)胞.如果能將rAAV載體和HSPC的優(yōu)勢(shì)結(jié)合起來(lái),將hFIX通過(guò)rAAV成功地轉(zhuǎn)導(dǎo)入HSPC,隨之表達(dá)于各系子代細(xì)胞中,有望得到安全的、穩(wěn)定的、方便的一次性治療