rAAV載體介導(dǎo)人凝血因子IX基因治療血友病B的研究.pdf

1、該研究以通用的腺相關(guān)病毒質(zhì)粒pSNAV-1為基礎(chǔ),構(gòu)建成分別以CMV和hEF1α為啟動(dòng)子含hFⅨ基因或熒光素酶(LUC)報(bào)告基因的4種重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,經(jīng)G418選擇培養(yǎng),分別得到包裝病毒用的載體細(xì)胞株.再用rAAV1和rAAV2各自的包裝輔助病毒感染載體細(xì)胞株,包裝并純化后得到6種高純度的重組AAV病毒.并制備了4株抗rAAV2的單克隆抗體.該研究表明:rAAV1轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞可能是通過多個(gè)受體所介導(dǎo),HPSG不是AAV1的受

2、體,rAAV1和rAAV2有不同細(xì)胞和組織親嗜性.當(dāng)rAAV1和rAAV2攜帶的外源基因表達(dá)量較低的情況下,丁酸鈉刺激能增強(qiáng)基因表達(dá),提高檢測(cè)的靈敏度.rAAV1與rAAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)的MOI(v.g./cell)超過一定范圍,其轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的表達(dá)量反而有所降低,存在過量抑制現(xiàn)象.rAAV2/hEF1a-hFⅨ轉(zhuǎn)導(dǎo)體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,有較高水平hFⅨ表達(dá);rAAV1介導(dǎo)hFⅨ在肌肉中表達(dá)量明顯高于rAAV2,為我們采用rAAV1肌肉途徑及rA