濟(jì)南地區(qū)異質(zhì)性萬(wàn)古霉素中介金葡菌的分離率及方法研究.pdf

1、研究背景：
　　 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)仍然是臨床上感染性疾病致病率和病死率較高的主要原因，以萬(wàn)古霉素為代表的糖肽類抗生素是各種指南所推薦的治療這類細(xì)菌感染的最有效藥物之一。近年來(lái)臨床萬(wàn)古霉素治療失敗的病例逐年增多，在世界范圍內(nèi)，引起了對(duì)萬(wàn)古霉素為代表的糖肽類抗生素耐藥問(wèn)題的關(guān)注。為此，2006年CLSI(the clinica

2、land laboratory standards institute，原NCCLS)修正了金葡菌對(duì)萬(wàn)古霉素的敏感性和抗性臨界值，即萬(wàn)古霉素敏感菌的MIC由原來(lái)的4μg/ml改為2μg/ml，萬(wàn)古霉素中介菌的MIC由先前的8～16μg/ml改為4～8μg/ml。根據(jù)這一新的規(guī)定，可以將MRSA對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥程度分為兩個(gè)水平：一種為高水平耐藥的VRSA(vancomycin-resistant staphylococcus aureus

3、)，其萬(wàn)古霉素MIC≥16μg/ml;另一種則為低水平耐藥的hVISA(heterogeneous vancomycin intermediate resistant staphylococcus aureus)和VISA( vancomycin intermediate resistant staphyl-ococcusareus)，其中VISA的MIC介于4～8μg/ml，而hVISA的情況較為特殊，目前報(bào)告多數(shù)hVISA的萬(wàn)古霉素

4、MIC介于1～4μg/ml，但是它們可以在含有萬(wàn)古霉素的平皿上以10-6的頻率產(chǎn)生萬(wàn)古霉素MIC水平在中介范圍的亞克隆(subclone)，這也是將之定義為“異質(zhì)性”的由來(lái)。事實(shí)表明，對(duì)萬(wàn)古霉素異質(zhì)性耐藥的金葡菌(hVISA)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于耐藥/中介的金葡菌(VRSA/VISA)，因此近年來(lái)hVISA的研究成為醫(yī)學(xué)上的熱點(diǎn)。迄今為止，濟(jì)南地區(qū)的異質(zhì)性萬(wàn)古霉素中介會(huì)葡菌(hVISA)的分離率尚無(wú)報(bào)道；在新標(biāo)準(zhǔn)下，尚無(wú)一種簡(jiǎn)單易行且具有高度敏感性

5、和特異性的方法以供臨床常規(guī)進(jìn)行hVISA的篩選。
　　 研究目的：
　　 (1)了解濟(jì)南地區(qū)臨床分離的MRSA標(biāo)本中異質(zhì)性萬(wàn)古霉素中介金葡菌(hVISA)的分離率。
　　 (2)對(duì)2ug/ml萬(wàn)古霉素(BHIV2)、4ug/ml萬(wàn)古霉素(BHIV4)及5ug/ml替考拉寧(BHIT5)腦心浸液瓊脂篩選法初篩的三種篩選方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 研究對(duì)象與方法：
　　 (1)對(duì)收集于濟(jì)南地區(qū)6家三甲醫(yī)院的

6、216株臨床分離的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)分別進(jìn)行2ug/ml萬(wàn)古霉素(BHIV2)、4ug/ml萬(wàn)古霉素(BHIV4)及5ug/ml替考拉寧(BHIT5)腦心浸液瓊脂篩選法初篩。
　　 (2)對(duì)瓊脂篩選法初篩的陽(yáng)性菌株進(jìn)行macroEtest(MET)法進(jìn)一步篩選。
　　 (3)對(duì)macroEtest(MET)法篩選的陽(yáng)性菌株用改良菌群分析策略-曲線下面積法(PAP-AUC)進(jìn)行確認(rèn)。
　　 結(jié)果：

7、　　 (1)BHIV2、BHIV4、BHIT5篩選法初篩的菌株數(shù)分別為：143株、19株、110株。
　　 (2)初篩的陽(yáng)性菌株經(jīng)macroEtest(MET)法進(jìn)一步篩選陽(yáng)性菌株分別為：32株、16株、29株。
　　 (3)macroEtest(MET)法篩選的陽(yáng)性菌株，經(jīng)改良菌群分析策略-曲線下面積法(PAP-AUC)最終確認(rèn)菌株分別為：23株、14株、21株。
　　 (4)三種方法篩選的陽(yáng)性菌株，減去重復(fù)

8、菌株，最終確認(rèn)為hVISA的為29株；則濟(jì)南地區(qū)hVISA的分離率至少為13.4％(29/216)。結(jié)論：
　　 (1)通過(guò)三種篩選方法，hVISA在本地區(qū)臨床分離的MRSA菌株都有一定的分離率，這可能是臨床萬(wàn)古霉素治療失敗的原因之一。
　　 (2)三種方法中BHIV2、BHIT5篩選法敏感性無(wú)差異，均高于BHIV4篩選法；BHIV2、BHIT5篩選法特異性亦無(wú)差異，BHIV4篩選法特異性高于BHIV2、BHIT5篩選法