異質性萬古霉素中介的金黃色葡萄球菌的篩選及耐藥機制初步研究.pdf

1、目的:研究解放軍總醫(yī)院臨床分離130株MRSA的耐藥情況，從中篩選hVISA，初步探討hVISA的耐藥機制。
　　方法:收集2008年1月-2009年12月130株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，采用微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法進行含多種新型抗菌藥物在內的體外藥敏試驗，使用BHIT5(含替考拉寧5μ g/ml的腦心浸液瓊脂)、BHIV6(含萬古霉素6μ g/ml的腦心浸液瓊脂)和Macrodilution Etests法(宏量Etests

2、法)對130株MRSA進行hVISA篩選并使用改良PAP-AUC(菌群分析策略)法進行確認。利用實時熒光定量PCR技術探討質控菌株N315與hVISA細胞壁合成相關基因的表達情況，利用PCR技術了解細胞壁相關基因的突變情況，利用透射電鏡觀察N315與hVISA細胞壁厚度，采用Graphpad Prism軟件對兩組間細胞壁相關基因相對表達量與細胞壁厚度之間的差異進行t檢驗。
　　結果:130株MRSA對抗MRSA一線用藥糖肽類抗生素

3、萬古霉素及替考拉寧均100％敏感，但部分MRSA在萬古霉素敏感范圍內出現(xiàn)高的MIC，萬古霉素MIC在1到2μg/ml總菌株數(shù)已達46株，占35.4％，對多種新一代抗菌藥物如達托霉素、利奈唑胺、替加環(huán)素全部敏感。130株MRSA中發(fā)現(xiàn)1株hVISA。MRSA細胞壁相關基因graF、graR在N315與hVISA兩株菌間相對表達量無明顯差異，細胞壁相關基因glms、PBP4、vraS、vraR、murZ、sgtB、dlt在hVISA中較N3

4、15表達上調，相對表達量差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。hVISA的vraS基因發(fā)生突變，第44位G替換了T，引起編碼的氨基酸發(fā)生改變，甘氨酸替換了纈氨酸。hVISA(36.72±1.04nm)的細胞壁較N315(28.15±1.25nm)明顯增厚，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論:130株MRSA雖對萬古霉素全部敏感，但部分MRSA在萬古霉素敏感范圍內出現(xiàn)高的MIC，萬古霉素MIC在1到2μ g/ml總菌株數(shù)已