烏司他丁對兔急性肺損傷保護作用及其機制研究.pdf

1、目的： 本實驗采用兔失血性休克復合內毒素ALI模型，觀察失血性休克復合內毒素ALI兔NF-κB的變化規(guī)律，探討ALI的發(fā)生發(fā)展與NF-κB的活化關系，研究應用烏司他丁抑制NF-κB的活化治療ALI的機制，以期為烏司他丁臨床治療ALI提供理論依據(jù)。 方法： 1、實驗分組 實驗動物采用新西蘭大耳白兔90只，隨機分為3組：對照組(A組)、失血性休克復合內毒素組(B組)、失血性休克復合內毒素＋烏司他丁治療組(C組

2、)。A、B、C組動物均進行麻醉、固定、動靜脈插管，操作成功后，B、C組動物在15分鐘內經(jīng)股動脈放血至平均動脈壓(MAP)40±5mmHg(記錄放血量)，通過放血或回輸?shù)姆绞骄S持MAP在該水平60分鐘后開始，在2h內用微泵由股靜脈回輸放出的自身血液及放血量2倍的乳酸鈉林格氏液復蘇；B組動物復蘇結束后用微泵將大腸桿菌內毒素(LPS)50ug/kg(稀釋成5ml)于30分鐘內自靜脈內泵入；C組動物于泵入與B組相同劑量LPS前靜推烏司他丁500

3、00U/kg(20000U/ml)；A組只給予麻醉、置管，不予放血及復蘇，在B、C組給予LPS的相應時間點，輸入與其相同劑量的生理鹽水。各組分別于制模成功后1h、4h、8h、24h、48h檢測動脈血氧分壓、血清TNF-α含量、肺組織內NF-κB含量、肺干濕重比(D/W)，并行肺組織學檢查。 2、主要實驗方法 (1)用失血性休克復合內毒素打擊法制作大耳白兔ALI模型； (2)用GEM P300血氣分析儀進行血氣分析

4、檢查； (3)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度； (4)采用免疫組織化學的方法觀察肺組織內NF-κB的變化情況，并用Smart Scape圖像分析儀對結果進行半定量分析； (5)觀察各組肺大體外觀，取左肺計算肺D/W，右肺下葉觀察肺組織病理學改變； 3、統(tǒng)計方法 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用X±SD表示，采用重復測量數(shù)據(jù)的兩因

5、素多水平方差分析，兩變量間的關系采用直線相關分析。P＞0.05為統(tǒng)計學無差異，P＜0.05或P＜0.01為統(tǒng)計學差異顯著。 結果： 1、各組動物的PaO2改變存在組間差別(P＜0.01)，各組PaO2在不同時間點變化的趨勢不同(P＜0.01)。其中B組動物各時相點PaO2均呈進行性下降，而C組PaO2在4h時達到最低值后逐漸上升，8h、24h、48h時均較B組明顯升高(P＜0.05)。 2、各組動物的TNF-α改

6、變存在組間差別(P＜0.01)，各組TNF-α在不同時間點變化的趨勢不同(P＜0.01)。其中B、C組動物1h后TNF-α均顯著高于A組，并均于4h達到最高峰，隨后逐漸下降，但C組降幅較B組明顯(P＜0.05)。 3、免疫組織化學結果發(fā)現(xiàn)：B、C組動物肺組織內NF-κB p65蛋白呈棕黃色陽性反應，其中B組NF-κB p65呈強陽性免疫反應；C組NF-κB p65呈弱陽性免疫反應。Smart Scape圖像分析后發(fā)現(xiàn)：各組動物的

7、NF-κB p65活化程度存在組間差別(P＜0.01)，各組NF-κB p65在不同時間點變化的趨勢不同(P＜0.01)。其中B、C組動物1h后NF-κB p65均顯著高于A組，并均于4h達到最高峰，隨后逐漸下降，但C組降幅較B組明顯(P＜0.05)。 4、各組動物的肺組織D/W值改變存在組間差別(P＜0.01)，各組D/W在不同時間點變化的趨勢不同(P＜0.01)。其中B組動物D/W進行性下降，而C組D/W在8h時達到最低值后

8、逐漸上升(P＜0.05)。 5、B組動物1h、4h、8h、24h、48h NF-κB活性與TNF-α含量相關性分析顯示，NF-κB活性與TNF-α含量之間的變化存在顯著相關性(r=0.8240，r=0.8760，r=0.8130，r=0.8260，r=0.8410。P＜0.05)。 6、肺組織病理切片示B組動物可見肺泡壁增厚、炎性細胞浸潤、局灶出血、血栓形成、部分肺泡萎陷、肺泡腔內可見水腫液，而C組動物肺組織可見少量炎性

9、細胞浸潤，出血少見，肺間質充血、水腫等病理改變較B組顯著減輕。兩者均隨時間延長而加重。 結論： 1、ALI早期肺組織NF-κB的活性表達、血清TNF-α的含量均明顯升高，且與動物的病情輕重相關，提示NF-κB和TNF-α參與了ALI早期的肺組織損傷并發(fā)揮重要作用。 2、相關分析提示，ALI早期NF-κB激活與TNF-α釋放之間的變化存在顯著相關性，提示NF-κB信號轉導通路的活化，促進早期炎癥因子大量釋放，導致A