烏司他丁對(duì)失血性休克大鼠肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、失血性休克是臨床常見(jiàn)的危重癥之一，肺往往是最先受累的器官。失血性休克并發(fā)急性肺損傷（acute lung injury，ALI）的死亡率達(dá)40%。內(nèi)毒素移位、細(xì)胞因子合成釋放、中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）激活等環(huán)節(jié)可能在失血性休克所致組織損傷中發(fā)揮重要作用。肺內(nèi)炎癥反應(yīng)失控和缺血/再灌注損傷是構(gòu)成創(chuàng)傷失血性休克后ALI的主要機(jī)制。白細(xì)胞尤其是中性粒細(xì)胞（PMN）既是引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合

2、征的主要細(xì)胞又是缺血/再灌注損傷主要參與者，成為介導(dǎo)休克后肺損傷的主要效應(yīng)細(xì)胞。如何早期抑制PMN的趨化、黏附，減少其氧自由基、蛋白酶和溶酶體酶的產(chǎn)生，減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，從而預(yù)防ALI的發(fā)生顯得尤為重要。 烏司他?。║linastatin，UTI）是一種來(lái)源于人體的高效廣譜的水解酶抑制劑，對(duì)胰蛋白酶、纖溶酶、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶具有較強(qiáng)的抑制作用。UTI本身來(lái)源于人體，無(wú)免疫原性，安全性高，應(yīng)是一種較理想的外源性蛋白酶抑制劑。U

3、TI被廣泛用于急性胰腺炎的治療，近年來(lái)其臟器保護(hù)作用成為研究熱點(diǎn)。既往研究顯示UTI對(duì)內(nèi)毒素等因素所致ALI有保護(hù)作用，但此類研究大多集中于感染性休克等模型，有關(guān)UTI對(duì)失血性休克所致肺損傷的作用研究較少。 本研究采用失血性休克模型，通過(guò)測(cè)定肺組織超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、血紅素氧化酶-1 （heme oxygenase-1，HO-1）和

4、肺葉濕/干重比（wet to dry weight ratio，W/D），并觀察肺組織病理學(xué)改變，探討UTI在失血性休克所致肺損傷的保護(hù)作用。 材料和方法: 1、動(dòng)物與分組： 成年雄性SD大鼠24只，SPF級(jí)，體重350～450g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為3組：假手術(shù)對(duì)照組（C組）、失血性休克組（H組）和烏司他丁治療組（U組），每組8只。 2、動(dòng)物模型建立及復(fù)蘇： 3%戊巴比妥鈉50

5、 mg/kg腹腔注射麻醉成功后，行左側(cè)股動(dòng)、靜脈插管術(shù)，分別用于有創(chuàng)動(dòng)脈壓監(jiān)測(cè)和補(bǔ)液。C組僅行上述操作，全程曠置作為基礎(chǔ)水平對(duì)照。另兩組上述操作完成后觀察10min，待循環(huán)穩(wěn)定后經(jīng)股動(dòng)脈勻速放血，10 min內(nèi)使平均動(dòng)脈壓（mean arterial blood pressure，MAP）降至40±5mmHg，并間斷回輸或放血維持此血壓。U組在休克維持60min時(shí)經(jīng)股靜脈注射UTI 50000 U/kg（溶于生理鹽水）；H組則注射等量生

6、理鹽水。休克維持60 min后完成失血性休克模型制作，隨后回輸全部失血及等量的乳酸林格液進(jìn)行復(fù)蘇，所有液體均于30min內(nèi)輸完。復(fù)蘇后4h快速放血處死動(dòng)物，取左肺切成直徑約1cm小塊投入液氮中，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱凍存?zhèn)錂z。 3、觀察指標(biāo)： 3．1 肺組織SOD活力和MDA含量測(cè)定。SOD活力采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，MDA含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定。試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，測(cè)定方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

7、 3．2 肺組織HO-1的測(cè)定采用Western-blot法測(cè)定。用HO-1蛋白帶的灰度峰值與對(duì)應(yīng)的β-actin灰度峰值之比代表HO-1的表達(dá)量。 3．3 肺組織W/D比值測(cè)定取右肺上葉，濾紙吸干肺表面水分，精確稱重后放入烤箱72 h（60℃），測(cè)定W/D比值。 3．4 肺組織病理學(xué)檢查取右肺中葉，4%多聚甲醛浸泡固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡（Olympus公司，×200）觀察肺組織病理學(xué)改變。

8、 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，所有計(jì)量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。先行方差齊性檢驗(yàn)，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析或Welch法檢驗(yàn)，多重比較采用LSD法或Dunnett's T3法，P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、一般情況：三組動(dòng)物體重及基礎(chǔ)MAP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．730； P=0．859）。 H組和U組放血量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．850）。

9、 2、肺組織SOD活力及MDA含量： 各組SOD活力比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0．000）；H組和U組SOD活力較C組顯著降低（P=0．000； P=0．000），但U組顯著高于H組（P=0．003）。 各組MDA含量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0．000）H組和U組MDA含量較C組顯著增高（P=0．000； P=0．011），而U組顯著低于H組（P=0．000）。 3、肺組織HO-1表達(dá)及W/D比值： 各組H

10、O-1表達(dá)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=151．446，P=0．000）H組和U組HO-1表達(dá)較C組顯著增高（P=0．000； P=0．000），而U組顯著低于H組（P=0．000）。 各組W/D比值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=19．223，P=0．000）H組和U組W/D比值較C組顯著增高（P=0．000； P=0．002），而U組顯著低于H組（P=0．016）。 4、肺組織病理學(xué)改變： C組肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺間質(zhì)無(wú)水腫、炎