HLA-DQ基因多態(tài)性及外源性吲哚與泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:本研究在既往研究的基礎(chǔ)上，對(duì)2009年3月-2011年3月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院性病門診泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者的臨床資料進(jìn)行流行病學(xué)研究，分析可能影響泌尿生殖道沙眼衣原體形成持續(xù)感染的相關(guān)因素，為更好的防治泌尿生殖道沙眼衣原體持續(xù)感染，提高生活質(zhì)量，提供依據(jù)。
　　 對(duì)泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者進(jìn)行HLA-DQ基因多態(tài)性分析，以期發(fā)現(xiàn)可能存在的易感基因，并嘗試闡釋可能發(fā)生的免疫途徑，以提示沙眼衣原體泌尿

2、生殖道感染后容易引起慢性持續(xù)感染的高危人群，從而加強(qiáng)沙眼衣原體泌尿生殖道慢性持續(xù)感染的早期預(yù)防;
　　 觀察外源性吲哚對(duì)國(guó)內(nèi)泌尿生殖道沙眼衣原體優(yōu)勢(shì)株E型標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株生長(zhǎng)的影響，以了解外源性吲哚在泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染形成中的作用，為臨床上泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染的防治奠定基礎(chǔ);
　　 方法:一、統(tǒng)計(jì)2009年3月-2011年3月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院性病門診泌尿生殖道沙眼衣原體患者的臨床資料，研究這一部

3、分病人的臨床特點(diǎn)，包括一般資料、職業(yè)分布、文化程度、性伴職業(yè)、是否合并感染等，總結(jié)天津地區(qū)泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者的流行病學(xué)特點(diǎn);
　　 二、采集泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者、一般感染患者和健康對(duì)照個(gè)體肘靜脈乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血2ml，以TKM法提取基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)-基因測(cè)序方法，分別對(duì)泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者、一般感染患者和健康對(duì)照各80例，進(jìn)行HLA-DQA

4、1、HLA-DQB1等位基因分型，分析泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者的基因多態(tài)分型，篩查易感等位基因，分析HLA-DQA1、HLA-DQB1等位基因與泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染的相關(guān)性;
　　 三、觀察外源性吲哚對(duì)沙眼衣原體生長(zhǎng)的影響。（一）用缺乏色氨酸的DMEM-10細(xì)胞培養(yǎng)液(簡(jiǎn)稱DMEM-10(-Trp)）培養(yǎng)的McCoy細(xì)胞96孔板接種0.1 MOI的沙眼衣原體E型、D型標(biāo)準(zhǔn)株及其臨床株;再分別應(yīng)用:DMEM

5、-10細(xì)胞培養(yǎng)液（簡(jiǎn)稱DMEM-10）、缺乏色氨酸的DMEM-10細(xì)胞培養(yǎng)液(簡(jiǎn)稱DMEM-10(-Trp)）和缺乏色氨酸的DMEM-10細(xì)胞培養(yǎng)液中加入10μM外源性吲哚的細(xì)胞培養(yǎng)液(簡(jiǎn)稱DMEM-10(-Trp)+IND）進(jìn)行處理，繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)，甲醇固定，碘染計(jì)數(shù)包涵體，觀察色氨酸缺乏時(shí)，外源性吲哚對(duì)E型、D型沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株生長(zhǎng)的影響。
　　 （二）將3-5 MOI的沙眼衣原體E型、D型標(biāo)準(zhǔn)株及其臨床株分別接

6、種至不同的用DMEM-10細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)的McCoy細(xì)胞6孔板;再分別應(yīng)用:DMEM-10、DMEM-10加5ng/ml重組人r-干擾素(簡(jiǎn)稱DMEM-10+IFN)和DMEM-10加5ng/ml重組人r-干擾素及50μM外源性吲哚(簡(jiǎn)稱DMEM-10+IFN+IND)三種細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng);繼續(xù)培養(yǎng)48-72h后，分別收集上清液，并用冰雙蒸水(DDW)溶解細(xì)胞，收集上述全部混合液，再接種至新的McCoy細(xì)胞6孔板;培養(yǎng)48h后甲醇固定

7、、碘染，計(jì)數(shù)包涵體，對(duì)比分析在重組人r-干擾素干預(yù)下外源性吲哚對(duì)E型、D型沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株生長(zhǎng)的影響。
　　 結(jié)果:一、2009年3月-2011年3月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院性病門診泌尿生殖道沙眼衣原體一般感染患者共1599例，發(fā)病例數(shù)波動(dòng)在724-875例/年，呈輕度上升趨勢(shì);年齡分布以20～39歲性活躍者發(fā)病最多，占74.79％;在性別分布中，男性多于女性，占68.38％（卡方值=8.1479，P=0.0043）;婚姻狀況

8、顯示大部分為已婚患者，占76.50％;在文化程度方面，一般感染患者以中學(xué)文化程度為主，占41.45％（卡方值=4.9627，P=0.0259）;在職業(yè)分布方面，以工人最多，占41.67％（卡方值=6.8248，P=0.0090）;性伴職業(yè)以賓館、飯店、洗浴中心、歌廳等特殊職業(yè)的服務(wù)員為主，占30.56％（卡方值=6.1601，P=0.0131）;在地區(qū)分布上，大部分為本市患者，占64.29％（卡方值=0.5866，P=0.4437）。泌

9、尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者在同時(shí)間段共158例，年齡分布亦以20～39歲組發(fā)病率最高，占75.86％（卡方值=0.0574，P=0.8107）;在性別分布中，女性發(fā)生持續(xù)感染的概率明顯高于男性，發(fā)病率為13.27％（卡方值=17.9217，P=0.0001）:大部分亦為已婚患者，占81.90％（卡方值=1.5584，P=0.2119）;文化程度以本科受高等教育人員患病較多，占38.79％（卡方值=4.1177，P=0.0424）

10、，學(xué)歷偏高;職業(yè)以商業(yè)職業(yè)居多，占36.21％（卡方值=6.4013，P=0.0114）;性伴職業(yè)以賓館、飯店、洗浴中心、歌廳等特殊職業(yè)的服務(wù)員和配偶為主，占31.03％(卡方值=5.4969，P=0.0190);在地區(qū)分布上，大部分亦為本市患者，占68.10％(卡方值=0.5866，P=0.4437);合并梅毒、白色念珠菌和支原體感染的情況要明顯高于一般感染患者（卡方值=4.9614,P=0.0259）。
　　 二、HLA-D

11、QA1*0102、DQA1*0501和HLA-DQB1*0602在泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者中的基因頻率分別為22.5％、5.0％和45％，在一般感染組的基因頻率分別為5％、20％和15％，而在健康對(duì)照組的基因頻率分別為2.5％、17.5％和22.5％。泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者的HLA-DQA1*0102等位基因頻率較一般感染組及健康對(duì)照組顯著性增高(x2=14.6286，P＜0.001); HLA-DQB1*06

12、02等位基因頻率明顯高于一般感染組及健康對(duì)照組(x2=14.0800， P＜0.001);而HLA-DQA1*0501等位基因在持續(xù)感染患者中顯著性下降(x2=6.2598，P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 三、缺乏色氨酸的沙眼衣原體國(guó)內(nèi)優(yōu)勢(shì)株E型標(biāo)準(zhǔn)株、臨床株分別應(yīng)用DMEM-10、DMEM-10(-Trp)和DMEM-10(-Trp)+ND三種細(xì)胞培養(yǎng)液處理后，DMEM-10(-Trp)組衣原體包涵體計(jì)數(shù)明顯低于DM

13、EM-10組和DMEM-10(-Trp)+IND組，差異有顯著性(P＜0.01);DMEM-10組和DMEM-10(-Trp)+IND組包涵體計(jì)數(shù)無(wú)明顯差別(P＞0.05)。說(shuō)明Ct.E在色氨酸缺乏時(shí)，生長(zhǎng)會(huì)受到明顯抑制，當(dāng)加入外源性吲哚后，衣原體的生長(zhǎng)又有明顯的恢復(fù)，說(shuō)明當(dāng)外源性吲哚存在時(shí)，泌尿生殖道沙眼衣原體國(guó)內(nèi)優(yōu)勢(shì)株E型株可以利用吲哚作為底物來(lái)合成色氨酸，從而獲得生長(zhǎng)所必須的色氨酸而可以快速的分裂、繁殖，外源性吲哚對(duì)色氨酸缺乏的衣

14、原體有顯著地拯救作用。沙眼衣原體E型標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株分別應(yīng)用DMEM-10、DMEM-10+IFN和DMEM-10+IFN+IND三種細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)處理后，DMEM-10+IFN組衣原體包涵體計(jì)數(shù)明顯低于DMEM-10組和DMEM-10+IFN+IND組，差異有顯著性(P＜0.01); DMEM-10組和DMEM-10+IFN+IND組包涵體計(jì)數(shù)無(wú)明顯差別(P＞0.05)。說(shuō)明當(dāng)外源性吲哚存在時(shí)，泌尿生殖道沙眼衣原體國(guó)內(nèi)優(yōu)勢(shì)株E型株可

15、以逃逸IFN-γ介導(dǎo)的清除作用，利用吲哚作為底物來(lái)合成生長(zhǎng)所必需色氨酸，從而可以快速的分裂、繁殖。作為對(duì)照的國(guó)外優(yōu)勢(shì)株D型標(biāo)準(zhǔn)株及其臨床株，經(jīng)過(guò)上述處理，亦出現(xiàn)類似結(jié)果。
　　 結(jié)論:一、泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染患者，以20～39歲性活躍年齡發(fā)病最多;女性發(fā)病率高于男性;已婚者多;學(xué)歷偏高，受本科高等教育人員患病較多;商業(yè)職業(yè)者居多;天津本地者居多;性伴職業(yè)以賓館、飯店、洗浴中心、歌廳等特殊職業(yè)的服務(wù)員和配偶為主;合并梅

16、毒、白色念珠菌和支原體混合感染的情況要明顯高于一般感染患者。
　　 二、HLA-DQA1*0102、HLA-DQB1*0602可能是泌尿生殖道沙眼農(nóng)原體慢性持續(xù)感染的易感基因或與易感基因相連鎖;HLA-DQA1*0501等位基因可能具有阻止發(fā)生泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染的作用。HLA可作為一個(gè)遺傳標(biāo)志，提示泌尿生殖道沙眼衣原體感染后容易引起慢性持續(xù)感染的高危人群，從而可加強(qiáng)泌尿生殖道沙眼衣原體慢性持續(xù)感染的早期預(yù)防。