生殖道沙眼衣原體感染患者調(diào)節(jié)性T細胞及抑制性細胞因子水平研究.pdf

1、第一部分：無創(chuàng)性生殖道沙眼衣原體感染診斷技術(shù)的建立
　　 目的：通過比較分析SAT法，PCR法和Clearview法檢測生殖道沙眼衣原體感染的靈敏度和特異度建立一種無創(chuàng)性生殖道沙眼衣原體檢測方法。
　　 方法：分別應(yīng)用clearview法，PCR法和SAT法對762例華山醫(yī)院性病門診初診患者進行生殖道沙眼衣原體感染檢測。根據(jù)“擴大金標準”，兩種或兩種以上檢測方法陽性者確定為生殖道沙眼衣原體感染。分別對三種方法的靈敏度和特

2、異度進行分析。
　　 結(jié)果：共有真陽性病例84例，其中男52例，女32例。SAT法檢測的靈敏度和特異度分別為98.81％和99.26％；PCR法檢測的靈敏度和特異度分別為98.81％和99.56％；Clearview法檢測的靈敏度和特異度分別為54.76％和94.10％。三種檢測方法的特異度無明顯差異。SAT法和PCR法檢測的靈敏度無明顯差異，Clearview法的靈敏度較SAT法和PCR法顯著降低。
　　 結(jié)論：SAT

3、法是一種靈敏度和特異度都很高的無創(chuàng)性生殖道沙眼衣原體檢測方法，可以廣泛應(yīng)用于臨床篩查。
　　 第二部分：生殖道沙眼衣原體感染患者外周血Treg及抑制性因子水平測定
　　 目的：研究生殖道沙眼衣原體感染患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg細胞)數(shù)量和及其分泌抑制性細胞因子功能的變化。
　　 方法：采用三色流式細胞儀檢測外周血CD4+CD25+及轉(zhuǎn)錄因子Foxp3+T細胞，共60例，分為三組

4、。其中20例生殖道沙眼衣原體感染伴炎癥患者；20例生殖道沙眼衣原體感染不伴炎癥患者；20例正常人。同時，用免疫磁珠細胞分選技術(shù)從外周血中分選出高純度的CD4+CD25+T細胞，檢測細胞內(nèi)白介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)分泌水平及經(jīng)體外PMA刺激24小時后再次檢測IL-10和TGF-β水平。
　　 結(jié)果：
　　 1)感染不伴炎癥組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞占CD4+T細胞比例為

5、5.82±0.91％；感染伴炎癥組的比例為5.84±0.87％；正常對照組的比例5.65±0.78％。三組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞占CD4+T細胞的比例無顯著差異(P>0.05)。
　　 2)感染不伴炎癥組外周血CD4+CD25+IL-10+T細胞和CD4+CD25+TGF-β+T細胞占CD4+CD25+T細胞的比例分別為0.47±0.21％和0.11±0.05％；感染伴炎癥組的比例分別為0.41±0.1

6、7％和0.10±0.04％；正常對照組比例分別為0.39±0.17％和0.09±0.04％。三組外周血抑制性細胞因子(IL-10、TGF-β)陽性細胞比例無顯著差異(P>0.05)。
　　 3)經(jīng)PMA刺激后24小時后，感染不伴炎癥組外周血CD4+CD25+IL-10+T細胞和CD4+CD25+TGF-β+T細胞占CD4+CD25+T細胞的比例分別為2.10±0.48％和0.98±0.34％；感染伴炎癥組的比例分別為1.37±0

7、.35％和0.56±0.20％；正常對照組比例分別為1.44±0.34％和0.58±0.18％。感染不伴炎癥組外周血抑制性細胞因子(IL-10、TGF-β)陽性細胞比例較正常對照和感染伴炎癥組顯著升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：生殖道沙眼衣原體感染患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞數(shù)量無明顯改變。經(jīng)PMA刺激后，感染無炎癥組患者外周血CD4+CD25+T細胞分泌抑制性細胞因子功能顯著得到增強。
　　

8、 第三部分：生殖道沙眼衣原體感染患者局部黏膜Treg水平研究
　　 目的：研究生殖道沙眼衣原體感染患者局部黏膜CD25和Foxp3表達水平。
　　 方法：應(yīng)用免疫熒光染色方法檢測女性生殖道沙眼衣原體感染患者宮頸黏膜CD25和Foxp3水平。共分三組：10例感染伴炎癥患者，10例感染不伴炎癥患者及10例正常對照。
　　 結(jié)果：女性生殖道沙眼衣原體感染患者局部宮頸黏膜有CD25陽性細胞和Foxp3陽性細胞熒光表達。正

9、常對照宮頸黏膜中無CD25陽性細胞和Foxp3陽性細胞熒光表達。感染不伴炎癥組宮頸黏膜CD25陽性細胞和Foxp3陽性細胞的數(shù)量和熒光強度都較感染伴炎癥組顯著升高。
　　 結(jié)論：生殖道沙眼衣原體感染后，CD25陽性和Foxp3陽性細胞從外周血或淋巴組織中遷移到局部生殖道黏膜并活化。感染不伴炎癥患者CD25陽性和Foxp3陽性細胞遷移數(shù)量及功能明顯強于感染伴炎癥患者。
　　 第四部分：生殖道沙眼衣原體感染患者局部粘膜抑制性

10、細胞因子檢測
　　 目的：研究生殖道沙眼衣原體感染患者局部生殖道黏膜抑制性細胞因子的mRNA水平。
　　 方法：應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR檢測宮頸粘膜組織中Treg細胞分泌的抑制性細胞因子IL-10、TGF-β、PD-1、CTLA-4和GITR的mRNA水平。共分三組，其中10例生殖道沙眼衣原體感染伴炎癥患者，10例生殖道沙眼衣原體感染不伴炎癥患者和10例正常人。
　　 結(jié)果：正常對照組、感染伴炎癥組和感染無炎

11、癥組IL-10、TGF-β、PD-1、CTLA-4、GITR含量有顯著差異(P<0.05)。其中正常組抑制性細胞因子水平最低，感染伴炎癥組較高，而感染無炎癥組細胞因子水平最高。
　　 結(jié)論：生殖道沙眼衣原體感染感染后，外周血Treg向局部黏膜轉(zhuǎn)移，并活化且分泌抑制性細胞因子。感染伴炎癥患者Treg活化適度，局部黏膜抑制性細胞因子較正常適度升高，感染不伴炎癥患者Treg活化過度，局部黏膜抑制性細胞因子水平過度升高。