泌尿生殖道沙眼衣原體體外單獨(dú)和聯(lián)合藥物敏感性檢測.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)感染是目前國內(nèi)外最常見的性病病原體，可引起尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、附睪炎、前列腺炎、不孕癥多種疾病，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已經(jīng)成為一個危害極大的公共健康問題。目前，泌尿生殖道Ct感染的發(fā)病率與其流行率密切相關(guān)，因此抗菌藥物治療是該病二級預(yù)防的重要策略；同時由于Ct疫苗至今仍不能用于臨床，因此抗菌藥物對于治療Ct感染就顯得更加重要。然而，泌尿生殖道Ct感染患者的臨床表現(xiàn)常

2、無特異性或呈隱匿性，不易引起重視，致使病情遷延、復(fù)發(fā)或反復(fù)感染，導(dǎo)致Ct對多種抗菌藥物的敏感性降低，臨床治療失敗病例急劇增加。
　　 目的：檢測泌尿生殖道沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株對阿奇霉素、米諾環(huán)素、莫西沙星、多西環(huán)素和利福平五種臨床常用抗菌藥物體外單獨(dú)和聯(lián)合藥物敏感性，研究其與藥物臨床療效的相關(guān)性和耐藥的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：收集2005～2009年間到天津市性傳播疾病研究所門診就診且符合采樣標(biāo)準(zhǔn)的患者的男性尿

3、道或女性宮頸上皮細(xì)胞，并記錄其臨床相關(guān)資料。采用McCoy細(xì)胞培養(yǎng)法對臨床株進(jìn)行培養(yǎng)，所有臨床株進(jìn)行五代盲傳培養(yǎng)，對陽性標(biāo)本繼續(xù)傳代培養(yǎng)，直至感染率達(dá)到90％以上，共獲得41株臨床菌株。對標(biāo)準(zhǔn)株和41株臨床株，分別采用微量稀釋法和棋盤稀釋法進(jìn)行五種常用抗菌藥的單獨(dú)和聯(lián)合藥敏檢測。核酸擴(kuò)增臨床株的ompl基因并用Alu I、Msp I雙酶切進(jìn)行基因分型。對臨床治療失敗病例的臨床株，PCR方法擴(kuò)增檢測與大環(huán)內(nèi)酯類耐藥相關(guān)的23S核蛋白體RN

4、A基因，通過產(chǎn)物測序檢測基因突變；限制性片段分析(RFLP)檢測gyrA喹諾酮耐藥決定區(qū)(Quinolone-Resistance DeterminingRegion，ORDR)常見的基因點(diǎn)突變。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用SPSS11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，在方差分析顯著的情況下，滿足方差齊性要求數(shù)據(jù)兩兩比較采用最下顯著差法即LSD(least-significant different)法進(jìn)行組間多重比較。以P<

5、0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：總共培養(yǎng)臨床標(biāo)本238例，得到41例陽性臨床株，陽性率約為17.23％。對此41株標(biāo)本進(jìn)行單獨(dú)藥敏，檢測最低抑菌濃度(MIC)(單位ug/ml)分別是：阿奇霉素0.063～0.5，莫西沙星0.03～0.24，米諾環(huán)素0.008～0.064，多西環(huán)素0.063～0.5，利福平0.002～0.016。聯(lián)合藥敏檢測部分抑菌濃度(FIC)示：阿奇霉素與莫西沙星、多西環(huán)素、利福平在體外聯(lián)合時，分別

6、對51.22％、53.66％和58.54％的菌株為協(xié)同或相加作用，拮抗作用較少；ANOVA檢驗(yàn)示，三組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(當(dāng)α=0.05時，P=0.755)。米諾環(huán)素與阿奇霉素、莫西沙星、利福平在體外聯(lián)合時，分別對90.24％、85.37％、92.68％的Ct菌株為拮抗作用，無協(xié)同作用。對臨床治療失敗菌株均未檢測到相應(yīng)的耐藥基因。
　　 結(jié)論：⑴成功分離培養(yǎng)Ct臨床株，為進(jìn)一步開展該病原體的致病機(jī)理、免疫機(jī)制、體外藥物敏感性檢