泌尿生殖道沙眼衣原體體外單獨和聯合藥物敏感性檢測.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)感染是目前國內外最常見的性病病原體，可引起尿道炎、宮頸炎、子宮內膜炎、附睪炎、前列腺炎、不孕癥多種疾病，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已經成為一個危害極大的公共健康問題。目前，泌尿生殖道Ct感染的發(fā)病率與其流行率密切相關，因此抗菌藥物治療是該病二級預防的重要策略；同時由于Ct疫苗至今仍不能用于臨床，因此抗菌藥物對于治療Ct感染就顯得更加重要。然而，泌尿生殖道Ct感染患者的臨床表現常

2、無特異性或呈隱匿性，不易引起重視，致使病情遷延、復發(fā)或反復感染，導致Ct對多種抗菌藥物的敏感性降低，臨床治療失敗病例急劇增加。
　　 目的：檢測泌尿生殖道沙眼衣原體標準株和臨床株對阿奇霉素、米諾環(huán)素、莫西沙星、多西環(huán)素和利福平五種臨床常用抗菌藥物體外單獨和聯合藥物敏感性，研究其與藥物臨床療效的相關性和耐藥的分子生物學機制。
　　 方法：收集2005～2009年間到天津市性傳播疾病研究所門診就診且符合采樣標準的患者的男性尿

3、道或女性宮頸上皮細胞，并記錄其臨床相關資料。采用McCoy細胞培養(yǎng)法對臨床株進行培養(yǎng)，所有臨床株進行五代盲傳培養(yǎng)，對陽性標本繼續(xù)傳代培養(yǎng)，直至感染率達到90％以上，共獲得41株臨床菌株。對標準株和41株臨床株，分別采用微量稀釋法和棋盤稀釋法進行五種常用抗菌藥的單獨和聯合藥敏檢測。核酸擴增臨床株的ompl基因并用Alu I、Msp I雙酶切進行基因分型。對臨床治療失敗病例的臨床株，PCR方法擴增檢測與大環(huán)內酯類耐藥相關的23S核蛋白體RN

4、A基因，通過產物測序檢測基因突變；限制性片段分析(RFLP)檢測gyrA喹諾酮耐藥決定區(qū)(Quinolone-Resistance DeterminingRegion，ORDR)常見的基因點突變。統計學方法：用SPSS11.5軟件進行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，在方差分析顯著的情況下，滿足方差齊性要求數據兩兩比較采用最下顯著差法即LSD(least-significant different)法進行組間多重比較。以P<

5、0.05為差異有統計學意義。
　　 結果：總共培養(yǎng)臨床標本238例，得到41例陽性臨床株，陽性率約為17.23％。對此41株標本進行單獨藥敏，檢測最低抑菌濃度(MIC)(單位ug/ml)分別是：阿奇霉素0.063～0.5，莫西沙星0.03～0.24，米諾環(huán)素0.008～0.064，多西環(huán)素0.063～0.5，利福平0.002～0.016。聯合藥敏檢測部分抑菌濃度(FIC)示：阿奇霉素與莫西沙星、多西環(huán)素、利福平在體外聯合時，分別

6、對51.22％、53.66％和58.54％的菌株為協同或相加作用，拮抗作用較少；ANOVA檢驗示，三組之間差異無統計學意義(當α=0.05時，P=0.755)。米諾環(huán)素與阿奇霉素、莫西沙星、利福平在體外聯合時，分別對90.24％、85.37％、92.68％的Ct菌株為拮抗作用，無協同作用。對臨床治療失敗菌株均未檢測到相應的耐藥基因。
　　 結論：⑴成功分離培養(yǎng)Ct臨床株，為進一步開展該病原體的致病機理、免疫機制、體外藥物敏感性檢