慢性重型乙型肝炎患者HBV前C-BCP區(qū)基因突變分析.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染的結(jié)局是由病毒、肝細胞和宿主免疫系統(tǒng)相互作用決定的。HBV感染重癥化導致的重型肝炎或肝衰竭在臨床上病情危重、發(fā)展迅速、病死率很高，是我國傳染病死亡的重要原因之一。重型乙型肝炎肝衰竭的發(fā)病機制尚未得到系統(tǒng)闡明。HBV基因突變是影響病毒生物學特性的基本因素之一，HBV突變有可能改變病毒的復制能力和致病性、改變抗原表位而影響免疫應答反應、產(chǎn)生抗病毒藥物耐藥性等，既有可能引起持續(xù)感染

2、，又有可能造成嚴重的肝細胞損傷。HBV基因組有4個主要開放讀碼框架(Open Reading Frames，ORF)：S基因(包括前S1、前S2和S區(qū))、C基因(包括前C和C區(qū))、P基因和X基因。此外，還包括多個與HBV復制轉(zhuǎn)錄相關(guān)的基因調(diào)控序列。國內(nèi)外已有一些文獻報道了HBV基因突變與慢性重型乙型肝炎(Chronic severe hepatitis B，CSHB；簡稱慢重肝)的關(guān)系，其中包括對HBV前C/基本核心啟動子(Basal

3、CorePromoter，BCP)突變的研究。研究表明前C/BCP區(qū)某些突變可以影響HBeAg的表達/分泌或增加病毒復制能力。有人認為分泌型HBeAg與HBcAg有共同的抗原表位，可以減緩細胞毒T淋巴細胞(CTL)對表達HBcAg的肝細胞的攻擊，因而該區(qū)突變不利于免疫耐受，但與慢性肝炎的病情加重相關(guān)。然而以往對前C/BCP基因突變研究結(jié)果并不一致，對上述觀點也有爭議，這可能與分析的樣本數(shù)較小以及方法學上的差異有關(guān)。本文旨在應用DNA序列

4、測定法進行多位點突變檢測，通過比對分析較大量慢重肝和慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B，CHB；簡稱慢乙肝)患者樣本HBV在各個位點上的突變發(fā)生率，解析HBV前C/BCP區(qū)基因突變與慢性乙肝重癥化的關(guān)系。 目的：本研究檢測了87例慢重肝患者血清HBV前C/BCP區(qū)突變情況，并通過與196例慢乙肝樣本的對比，分析探討了HBV前C/BCP區(qū)核苷酸突變與乙肝重癥化的關(guān)系。 方法：研究對象均為成年患者，收集87

5、例慢重肝和196例慢乙肝患者血清，提取HBV DNA，采用經(jīng)我們改進的巢式PCR技術(shù)，擴增HBV前C/BCP區(qū)基因，對PCR產(chǎn)物進行DNA測序，用NBI軟件比對結(jié)果。根據(jù)文獻報道，重點檢測了G1896、A1762、G1764、T1753、G1862和G1899共6個影響HBeAg表達、分泌或HBV復制能力的位點突變。 結(jié)果： (1)6個位點突變?nèi)繛殛幮哉撸郝馗谓M有3例，占3.4％，慢乙肝組有55例，占28.1％，兩組間

6、有顯著差異(P＜0.01)。 (2)在檢測出突變的患者中，6個位點上慢重肝組在每個位點突變頻率上均較慢乙肝組高，其中5個位點上的突變檢出率有統(tǒng)計學意義，分別為A1762(78.2％vs56.6％，P＜0.01)、G1764(88.5％vs61.2％，P＜0.01)、G1862(9.2％vs2.0％，P＜0.05)、G1896(52.9％vs34.2％，P＜0.01)，G1899(25.3％vs7.1％，P＜0.01)。

7、(3)此外，插入/缺失突變形式在慢重肝組的檢出率顯著高于慢乙肝組(10.3％vs1.0％，P＜0.01)。 (4)多聯(lián)核苷酸替換突變計算也顯示慢重肝組的檢出率顯著高于慢乙肝組：三聯(lián)或三聯(lián)以上核苷酸替換的檢出率分別為56.3％和35.2％(P＜0.01)，四聯(lián)或四聯(lián)以上核苷酸替換的檢出率分別為25.3％和8.7％(P＜0.01)。 結(jié)論：HBV前C/BCP區(qū)基因突變發(fā)生頻率的增加與慢性乙肝發(fā)生重癥化相關(guān)，慢乙肝患者在發(fā)生H