9-AC對HL-60細(xì)胞凋亡和c-myc表達(dá)的影響及其可能影響因素的研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡是多細(xì)胞生物體主動清除與機體不相適應(yīng)、以及衰老細(xì)胞的重要自穩(wěn)機制,在胚胎發(fā)育造型、細(xì)胞數(shù)量的精細(xì)調(diào)控以及潛在的危險細(xì)胞的清除等方面發(fā)揮重要作用.細(xì)胞凋亡的觸發(fā)是級聯(lián)式基因表達(dá)的結(jié)果,包括許多種癌基因和抑癌基因參與這一過程.細(xì)胞凋亡的病理性改變在某些疾病,包括白血病的發(fā)病學(xué)上具有重要的地位.相應(yīng)地,采取某些方法干預(yù)細(xì)胞凋亡過程可望成為這些疾病的治療手段.9-羧酸蒽(anthracene-9-carboxylic acid,9-AC

2、)屬于芳香族化合物,作為氯通道抑制劑而廣泛應(yīng)用于通道特性的研究.近年來,膜片鉗研究發(fā)現(xiàn),9-AC可通過抑制一種新型磷酸酶來調(diào)節(jié)某些通道蛋白的活性.然而此方面的研究還比較局限.主要實驗結(jié)果:1.細(xì)胞生長曲線呈標(biāo)準(zhǔn)的S型.細(xì)胞經(jīng)過7~8d的對數(shù)生長期后,進(jìn)入平臺期.細(xì)胞的倍增時間為24h左右.細(xì)胞數(shù)目在1×10<'7>~1×10<'9>/L時,細(xì)胞數(shù)的對數(shù)與A<,490nm>的值呈線性相關(guān).在濃度為5×10<'-4>mol/L的9-AC作用

3、48h后,HL-60細(xì)胞數(shù)目下降明顯. 2.在5×1O<'-4>mol/L 9-AC作用48h后,細(xì)胞發(fā)生了明顯的凋亡.主要表現(xiàn)為:電鏡下細(xì)胞器密集;細(xì)胞表面起泡,微絨毛消失;核染色質(zhì)邊聚,呈新月狀改變;染色質(zhì)固縮,被出芽的胞膜包裹形成典型的凋亡小體.DNA瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)特征性梯形條帶.流式細(xì)胞儀分析表明,實驗組HL-60細(xì)胞出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰---凋亡峰,而對照組細(xì)胞凋亡比例小,未見凋亡峰出現(xiàn). 3.在該實驗條件下,9-AC不能

4、誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的分化.同時該實驗條件下的DMSO也不能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的分化.4.在該實驗條件下,9-AC(5×10<'-4>mol/L)可使培養(yǎng)的HL-60髓性白血病細(xì)胞c-myc基因表達(dá)增加.實驗發(fā)現(xiàn),PKA的抑制劑H-89(1×10<'-5>mol/L)雖然能減弱9-AC誘導(dǎo)c-myc基因的表達(dá),但是不能完全抑制.酪氨酸磷酸酶(PTP)的抑制劑PAO<,2>(2×10<'-3>mol/L)可以增強c-myc基因表達(dá),但PAO