雌激素通過雌激素受體β上調IL-6分泌促進非小細胞肺癌進展.pdf

1、目的：肺癌是世界上死亡率最高的惡性腫瘤，其中非小細胞肺癌（NSCLC）占肺癌總數(shù)85％左右。已有大量文獻報道白介素-6（IL-6）是NSCLC中關鍵的腫瘤促進細胞因子。前期研究發(fā)現(xiàn)雌激素主要通過雌激素受體β（ERβ）在NSCLC的進展中起重要促進作用。已有研究證實雌激素與 IL-6信號通路相互作用，協(xié)同促進乳腺癌、卵巢癌等雌激素靶器官腫瘤的進展。但在雌激素非靶器官肺癌中雌激素和 IL-6有無相互作用還未見報道，雌激素是否能夠調節(jié)NSCL

2、C細胞IL-6的分泌還不得而知。本研究首先檢測ERβ與IL-6在NSCLC組織中的表達和相關性，然后在體外實驗中探討NSCLC中雌激素對IL-6分泌的調控及其可能的機制，為NSCLC內分泌和免疫治療策略提供新的理論基礎和方向。
　　方法：本課題分兩部分進行研究：
　　第一部分在人NSCLC組織中檢測ERβ和IL-6的表達，分析其表達相關性和共表達與臨床病理特征的關系。應用組織芯片技術和免疫組化方法，檢測2012年2月-201

3、4年2月我院手術的103例NSCLC腫瘤組織和98例癌旁正常肺組織中 ERβ和 IL-6的表達。應用卡方檢驗分析 ERβ和 IL-6表達與NSCLC臨床病理特征的相關性，用Spearman等級法分析ERβ和IL-6之間表達的相關性。
　　第二部分在體外實驗探討NSCLC中雌激素通過ERβ對IL-6分泌的影響及其可能的機制：1.NSCLC細胞系A549分別給予不同濃度梯度（1nM,10nM,100nM）17β-雌二醇（17β-est

4、radiol，E2，ER配體）處理，用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6的含量，以探討IL-6分泌是否與雌激素濃度相關；2.將NSCLC細胞系A549分為7組：空白對照（con）組、E2組、PPT（ERα特異性激動劑）組、DPN（ERβ特異性激動劑）組、氟維司群（Fulvestrant，F(xiàn)ul，雌激素抑制劑）組、E2+Ful組、DPN+Ful組，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6的含量，Western-blot檢測細胞內IL-6

5、表達，以探討雌激素通過ERβ調節(jié)IL-6分泌和表達；3.將NSCLC細胞系A549分為6組處理：空白對照（con）組、E2組、Ful組、E2+Ful組、E2+IL-6組、 E2+Ful+IL-6組，檢測細胞增殖（CCK8），以探討雌激素上調IL-6分泌對細胞增殖能力的影響；4.將NSCLC系A549分為6組處理：con組、E2組、Ful組、E2+Ful組、E2+Ful+MAPK抑制劑（U0126）組、 E2+Ful+PI3K（LY294

6、002）抑制劑組，Western-blot分別檢測t/pMAPK、t/pAkt的表達，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6的含量，以探討雌激素上調IL-6分泌的可能機制。
　　結果：通過組織芯片-免疫組織化學技術檢測發(fā)現(xiàn)：NSCLC中ERβ表達陽性率為91.3％(94/103)，癌旁正常肺組織中ERβ表達陽性率為57.1％(56/98)，NSCLC中ERβ顯著過表達。在NSCLC中IL-6表達陽性率為89.3％(92/103)，

7、癌旁正常肺組織中IL-6表達陽性率為42.9％(42/98)；NSCLC中IL-6顯著過表達。NSCLC中ERβ1、IL-6共表達陽性率為82.5％(85/103)，顯著高于癌旁正常肺組織中ERβ、IL-6共表達陽性率22.4％(22/98)。Spearman等級法分析ERβ與IL-6表達有正相關性，尤其在肺鱗癌中ERβ表達與IL-6表達有顯著相關性。
　　在體外實驗中發(fā)現(xiàn)：1. NSCLC細胞系A549給予不同濃度梯度E2，細胞

8、培養(yǎng)上清中IL-6的含量隨E2濃度的增加而增加，E2誘導的促IL-6分泌作用可被其受體阻斷劑氟維司群(ful)阻斷，提示雌激素能夠促進腫瘤細胞分泌IL-6；2.E2、DPN促進細胞內IL-6蛋白的表達和培養(yǎng)液中IL-6分泌，E2+Ful、DPN+Ful組細胞內IL-6表達和上清IL-6分泌較E2、DPN組明顯下降，同時發(fā)現(xiàn)PPT組IL-6蛋白的表達和培養(yǎng)液中IL-6分泌與對照組無明顯差異，提示雌激素通過ERβ調節(jié)IL-6分泌和表達；3.

9、細胞增殖的能力在E2組中較對照組明顯增強，E2+IL-6組細胞增殖能力較E2組增強，加入Ful后E2的促進增殖作用被抑制，提示雌激素可能通過上調IL-6分泌促進細胞增殖；4. pMAPK、pAkt在E2組表達升高，在E2+Ful、E2+Ful+MAPK抑制劑、 E2+Ful+Akt抑制劑組中下降，同時發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液上清中IL-6的含量在E2+Ful、E2+Ful+MAPK抑制劑、 E2+Ful+Akt抑制劑組下降，提示雌激素通過ERβ激活M

10、APK和Akt通路上調IL-6分泌。
　　結論：在這項研究中發(fā)現(xiàn)，ERβ與IL-6在NSCLC組織中存在過表達，ERβ表達與IL-6的表達在NSCLC組織中具有正相關。雌激素能夠通過ERβ促進NSCLC細胞IL-6分泌，進而促進NSCLC細胞增殖，其機制可能與激活MAPK和Akt信號通路有關，因此認為ERβ可能通過激活IL-6免疫信號通路而在NSCLC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，這可能是雌激素促進NSCLC進展的重要機制之一，更進一步