人谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶Pi基因的克隆及其蛋白的表達(dá)和純化.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、該研究用RT-PCR技術(shù)從人胎盤(pán)組織獲取人谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶Pi(GSTPi)基因的cDNA序列,將其擴(kuò)增產(chǎn)物GSTPi基因插入到原核克隆載體pMD18-T中,用PCR擴(kuò)增、酶切分析及序列測(cè)定等方法對(duì)重組質(zhì)粒pMD18-T-GSTPi進(jìn)行鑒定,將測(cè)序正確的GSTPi基因連接到表達(dá)載體pMAL-c2x多克隆位點(diǎn)中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMAL-c2x-GSTPi,鑒定后,用IPTG對(duì)重組子JM109(pMAL-c2x-GSTPi)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),

2、表達(dá)產(chǎn)物用麥芽糖親和層析法純化.該研究旨在克隆人GSTPi基因并建立體外GSTPi代謝解毒酶基因表達(dá)菌株JM109(pMAL-c2x-GSTPi),獲取并純化GSTPi蛋白,為研究GSTPi真核細(xì)胞表達(dá),研究真核細(xì)胞中GSTPi酶抗細(xì)胞毒性作用、抗細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化活性作用和腫瘤藥物耐藥性奠定基礎(chǔ),為毒理學(xué)、腫瘤的化學(xué)預(yù)防研究提供應(yīng)用基礎(chǔ).結(jié)論:1.成功構(gòu)建了重組克隆質(zhì)粒pMD18-T-GSTPi和重組表達(dá)質(zhì)粒pMAL-c2x-GSTPi.2

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