棗谷胱甘肽轉移酶的克隆、表達及其與棗瘋病相關性研究.pdf

1、谷胱甘肽轉移酶(Glutathione S-transferases,GSTs)在植物體內普遍存在,是由多基因家族編碼的多功能蛋白酶。依據同源性不同,GSTs在高等植物中可典型地分為Phi、Tau、Zeta、Lambda、Theta和脫氫抗壞血酸還原酶(Dehydroascorbate reductases,DHARs)6類,其中Phi和Tau類是植物本身所特有的類別。GSTs在調節(jié)植物的生長發(fā)育中有重要作用,當植物受生物和非生物因素的

2、脅迫時會誘導GSTs表達,所以研究GSTs對探討植物的生長發(fā)育以及植物對環(huán)境脅迫的反應機制都有重要作用。本試驗應用Step out PCR(SO-PCR)改良RACE技術成功得到了棗GSTs完整編碼區(qū)序列,并對其相關功能進行了分析。棗GST基因的克隆與分析目前國內外尚無報道。主要結果如下:
　　 1、利用同源基因克隆法和改良的RACE技術,首次獲得了棗(Ziziphus jujubaMill.)谷胱甘肽轉移酶(ZjGSTU1)全

3、長序列,長度為914 bp,包括669 bp組成的開放閱讀框(基因登錄號HM345954),編碼222個氨基酸；3'端非編碼區(qū)206 bp。
　　 2、經氨基酸序列比對和系統(tǒng)進化分析,確定本試驗獲得的棗谷胱甘肽轉移酶基因(ZjGSTU1)屬于谷胱甘肽轉移酶(GSTs)的Tau類家族,該基因與Genbank中楊樹、蓖麻、擬南芥和燈籠椒中的GST同源性分別為84％、76％、74％、73％。
　　 3、對獲得的棗谷胱甘肽轉移酶

4、完整編碼區(qū)序列進行了原核表達,在菌液沉淀中有大約30kDa的蛋白存在。經NCBI預測,棗ZjGSTU1編碼約25kDa蛋白,pET-30a的His標簽編碼約5.5kDa蛋白,兩者之和與沉淀中大量表達的蛋白大小一致。證明沉淀中大量表達的蛋白即為棗ZjGSTU1表達蛋白。隨后,將純化后的蛋白送河北省科學院生物研究所進行了抗體制備,獲得理想結果。
　　 4、通過組培苗和田間材料的綜合Western blot分析,證明棗樹中ZjGSTU