氧自由基、鈣離子在心肌細胞凋亡中的作用及?；撬?、胺腆酮、鉀通道開放劑等的影響研究.pdf

1、目的：該課題以探討細胞凋亡在心肌缺血-再灌注損傷和氧化應(yīng)激中的作用,以及采用拮抗自由基和鈣超載的藥物或措施抑制心肌細胞凋亡的可能性和意義.結(jié)論：1.細胞凋亡的檢測需多種方法相結(jié)合,其中AnnexinV-FITC染色法可識別出凋亡早期的細胞（2-3h）,而且能夠區(qū)別細胞凋亡與壞死,有較高的特異性和靈敏性,是目前較理想的凋亡檢測方法.2.培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞缺氧2h-復(fù)氧6h后,除出現(xiàn)壞死指標(biāo)外,TUNEL呈現(xiàn)陽性染色,透射電鏡發(fā)現(xiàn)典型的

2、凋亡細胞,流式細胞儀PI染色法出現(xiàn)明確的亞二倍體峰,Bax表達明顯增強.3.培養(yǎng)的心肌細胞在單純?nèi)毖?h組和單純?nèi)毖?8h+換液組,TUNEL檢測、流式細胞儀、透射電鏡皆未發(fā)現(xiàn)陽性凋亡指標(biāo),說明單純?nèi)毖跷凑T導(dǎo)心肌細胞凋亡.4.心肌缺血-再灌注在出現(xiàn)細胞凋亡的同時,伴有顯著的MDA含量升高,提示氧自由基可能是缺血-再灌注致心肌細胞凋亡的始動和關(guān)鍵性介質(zhì).5.流式細胞儀PI染色法呈現(xiàn)典型的亞二倍體峰,流式細胞儀雙標(biāo)法檢測發(fā)現(xiàn)較多Annexi

3、n V<'+>PI<'->的凋亡細胞.高濃度過氧化氫（1mmol/L）則主要致使細胞壞死.因此,外源性羥自由基可劑量依賴性地誘導(dǎo)心肌細胞凋亡或壞死.6.Caspase-3（CPP32）的競爭性抑制劑Z-DEVD-FMK可對抗過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細胞凋亡,表明Caspase-3途徑可能是OH-誘導(dǎo)心肌細胞凋亡的信號通路之一.7.IPC使大鼠心肌I-R模型的TUNEL陽性細胞數(shù)明顯減少,同時Bax蛋白表達降低,說明IPC可減輕心肌細胞凋亡.8

4、.大鼠心臟IPC后,心肌SOD活性增加,MDA含量顯著下降;吡那地爾也減少培養(yǎng)心肌細胞缺氧-復(fù)氧后MDA的產(chǎn)生.提示抑制氧自由基介導(dǎo)的細胞凋亡可能是IPC及鉀通道開放劑心肌保護作用的重要機制.9.單純IPC（缺血5min-再灌注10min,共重復(fù)3次,不進行后續(xù)的長時間心肌I-R）后6.5取心肌標(biāo)本,TUNEL法檢測陽性,說明出現(xiàn)了心肌細胞凋亡.提示IPC在誘導(dǎo)內(nèi)源性保護機制的同時,可能與啟動了機體的凋亡機制,使最脆弱的部分細胞發(fā)生凋亡

5、;這有可能參與IPC的延遲保護作用.10.?；撬岷桶诽笸墒闺x體心肌細胞缺氧-復(fù)氧、過氧化氫處理及在體心肌I-R的心肌損害程度減輕,并伴有MDA含量降低,表明牛磺酸及胺腆酮具有抗氧化活性;11.大體模型發(fā)現(xiàn)阿斯匹林組6-keto-PGF<,1α>水平明顯低于I-R組,而血漿CPK水平、心肌梗死范圍及凋亡相關(guān)基因的表達與I-R組相似,表明阿斯匹林并未明顯減輕心肌I-R損傷.12.單個心肌細胞缺氧-復(fù)氧或受過氧化氫作用后即刻,細胞內(nèi)鈣熒光強