Sfi1p功能性多肽與Cdc31p作用的研究.pdf

1、大分子與大分子、大分子與小分子之間的相互作用是生命過程中生物信息調控的主要方式之一，當它們發(fā)生異常作用時則會影響生命體正常的生長和繁殖。在生物體中，蛋白質作為生命活動的執(zhí)行者，是生物體中相當重要的大分子。
　　 其中Sfilp是酵母細胞非常重要的蛋白，其與Cdc31p間的相互作用影響了釀酒酵母細胞的有絲分裂及減數分裂，是酵母細胞周期分裂過程中的一個關鍵蛋白。其內部結構由21個重復序列和20個間隔所組成，每一個重復序列的保守的氨基

2、酸序列為LLX3F/LX2W，由此序列可知，苯丙氨酸(F)是一個較為保守的氨基酸，其對于Sfi1p與Cdc31p以1∶1摩爾比相互作用具有重要作用，且間隔序列的“彈性繩模型”為二者作用提供有利空間條件。因此可以說重復序列和間隔是Sfi1p重要的功能性結構。因此本論文通過對F分別突變?yōu)榘腚装彼?C)、蘇氨酸(T)、酪氨酸(Y)、異亮氨酸(I)不同的氨基酸發(fā)現，突變?yōu)榘腚装彼岷?，?7個重復序列多肽的末端構象不同于突變?yōu)槠渌陌被針嬒?。?/p>

3、其原因為苯丙氨酸為芳香族氨基酸，分子量為165.19，而其它的氨基酸為脂肪族氨基酸，分子量較小，空間結構小,對多肽α螺旋結構骨架有影響導致其結構的改變。
　　 隨后，采用PCR技術克隆將664位苯丙氨酸突變?yōu)榘腚装彼岬牡?7個重復序列基因序列，命名為sfi1/17;同樣克隆Sfi1p的第17、18個重復序列的基因命名為SFI1/17-18及Cdc31p的全基因序列CDC31。并分別將其克隆至載體pGAD424和pGBT9上，構建

4、載體pGAD424-sfi1/17、pGAD424-SFI1/17-18和pGBT9-CDC31。隨后采用酵母雙雜交技術發(fā)現突變的Sfi1/17多肽與Cdc31p不能發(fā)生相互作用，野生型Sfi1/17-18多肽可與Cdc31p發(fā)生相互作用，因此，將664位苯丙氨酸突變?yōu)榘腚装彼岷笥绊懥薙fi1p生物功能的正常發(fā)揮。
　　 最后，本文還研究苯氧嘧啶類化合物和Taq DNA聚合酶的相互作用。通過用氟原子對化合物4-甲基-6-苯酚基-