傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)和鯉春血癥病毒(SVCV)納米熒光試紙條病原快速鑒定技術(shù)的研究和應(yīng)用.pdf

1、隨著水產(chǎn)貿(mào)易的發(fā)展，傳染性造血器官壞死病（IHN）、鯉春病毒血癥（SVC）從世界局部范圍流行發(fā)展到各國都有爆發(fā)報道，成為危害全球范圍水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)較為嚴(yán)重的病害。本研究通過制備的單克隆抗體和多克隆抗體建立了兩種主要水生動物病毒——傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）、鯉春病毒血癥病毒（SVCV）的免疫納米晶試紙條的快速檢測方法。
　　篩選出兩種病毒親和性較好的單克隆抗體（I3A9、S4F9），將制備的單抗與表面修飾的熒光納米晶顆粒進(jìn)行共

2、價偶聯(lián)，試驗表明與50μL1mg/mL熒光納米晶顆粒共價偶聯(lián)的最佳單抗量為150μg，進(jìn)而利用單抗標(biāo)記的熒光納米晶材料制備樣品墊。將純化的多抗噴涂在硝酸纖維素膜的檢測區(qū)作為檢測線，用兔抗鼠IgG作為硝酸纖維素膜上的質(zhì)控線包被抗體，濃度均配制為1 mg/mL后噴制檢測線和質(zhì)控線，利用以上材料組裝成了熒光納米晶發(fā)光試紙條。
　　利用熒光納米晶顆?？焖贆z測試紙對不同稀釋度的IHNV和SVCV病毒液進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃度在5 ng/mL以

3、上的樣品均為陽性結(jié)果，檢測濃度1 ng/mL樣品為可疑，條帶模糊不清，從而表明該試紙條的檢測靈敏度至少能達(dá)到5 ng/mL。使用試紙條檢測狗魚彈狀病毒（PFRV）、牙鲆彈狀病毒（HRV）、傳染性胰臟壞死病毒（IPNV）、病毒性神經(jīng)壞死病毒（VNNV）、鰤魚腹水病毒（YAV）、草魚呼腸孤病毒（GCRV）和錦鯉皰疹病毒（KHV）等魚類病毒，均無交叉反應(yīng)，表現(xiàn)出良好的特異性。對隨機(jī)挑取的3個不同批次間的試紙條進(jìn)行重復(fù)試驗，每一批次挑取10個試

4、紙條分別對陽性樣品和陰性樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果完全一致。取30個同一批次的試紙條，分別對陽性樣品和陰性樣品進(jìn)行3次重復(fù)檢測，結(jié)果完全一致，說明試紙條重復(fù)性良好。將同一批次的試紙條在4 ℃條件下保存不同時間后進(jìn)行檢測，結(jié)果表明,于4℃保存六個月具有良好的穩(wěn)定性。將臨床采集的215份魚類樣品和自制的盲樣分別使用IHNV、SVCV試紙條進(jìn)行檢測，并與PCR法進(jìn)行比較，這兩種方法的符合率分別是98.60％、98.33%。
　　本論文制備的試紙