傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)和鯉春血癥病毒(SVCV)納米熒光試紙條病原快速鑒定技術(shù)的研究和應(yīng)用.pdf

1、隨著水產(chǎn)貿(mào)易的發(fā)展，傳染性造血器官壞死?。↖HN）、鯉春病毒血癥（SVC）從世界局部范圍流行發(fā)展到各國都有爆發(fā)報(bào)道，成為危害全球范圍水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)較為嚴(yán)重的病害。本研究通過制備的單克隆抗體和多克隆抗體建立了兩種主要水生動(dòng)物病毒——傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）、鯉春病毒血癥病毒（SVCV）的免疫納米晶試紙條的快速檢測(cè)方法。
　　篩選出兩種病毒親和性較好的單克隆抗體（I3A9、S4F9），將制備的單抗與表面修飾的熒光納米晶顆粒進(jìn)行共

2、價(jià)偶聯(lián)，試驗(yàn)表明與50μL1mg/mL熒光納米晶顆粒共價(jià)偶聯(lián)的最佳單抗量為150μg，進(jìn)而利用單抗標(biāo)記的熒光納米晶材料制備樣品墊。將純化的多抗噴涂在硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)作為檢測(cè)線，用兔抗鼠IgG作為硝酸纖維素膜上的質(zhì)控線包被抗體，濃度均配制為1 mg/mL后噴制檢測(cè)線和質(zhì)控線，利用以上材料組裝成了熒光納米晶發(fā)光試紙條。
　　利用熒光納米晶顆?？焖贆z測(cè)試紙對(duì)不同稀釋度的IHNV和SVCV病毒液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃度在5 ng/mL以

3、上的樣品均為陽性結(jié)果，檢測(cè)濃度1 ng/mL樣品為可疑，條帶模糊不清，從而表明該試紙條的檢測(cè)靈敏度至少能達(dá)到5 ng/mL。使用試紙條檢測(cè)狗魚彈狀病毒（PFRV）、牙鲆彈狀病毒（HRV）、傳染性胰臟壞死病毒（IPNV）、病毒性神經(jīng)壞死病毒（VNNV）、鰤?mèng)~腹水病毒（YAV）、草魚呼腸孤病毒（GCRV）和錦鯉皰疹病毒（KHV）等魚類病毒，均無交叉反應(yīng)，表現(xiàn)出良好的特異性。對(duì)隨機(jī)挑取的3個(gè)不同批次間的試紙條進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，每一批次挑取10個(gè)試

4、紙條分別對(duì)陽性樣品和陰性樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果完全一致。取30個(gè)同一批次的試紙條，分別對(duì)陽性樣品和陰性樣品進(jìn)行3次重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果完全一致，說明試紙條重復(fù)性良好。將同一批次的試紙條在4 ℃條件下保存不同時(shí)間后進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明,于4℃保存六個(gè)月具有良好的穩(wěn)定性。將臨床采集的215份魚類樣品和自制的盲樣分別使用IHNV、SVCV試紙條進(jìn)行檢測(cè)，并與PCR法進(jìn)行比較，這兩種方法的符合率分別是98.60％、98.33%。
　　本論文制備的試紙